Ανοσοενζυματική εξέταση αίματος με ερμηνεία δεικτών. Διαγνωστικά ELISA: ποια είναι η ουσία, ο ορισμός των αντισωμάτων, πώς πραγματοποιείται και σε ποιες ασθένειες είναι αποτελεσματική; Τι είναι τα διαγνωστικά IF

Προκειμένου να προσδιοριστεί το επίπεδο της περιεκτικότητας σε τέτοιες βιολογικά δραστικές ουσίες όπως τα ανοσολογικά σύμπλοκα, απαιτείται ειδική εργαστηριακή μελέτη. Εάν υπάρχει υποψία αιματολογικής, λοιμώδους ή αυτοάνοσης νόσου, οι ειδικοί συνταγογραφούν εξέταση αίματος για ELISA. Κατά τη διάρκεια του άρθρου, θα εξετάσουμε τι είναι, πώς να προετοιμαστείτε για αυτό, τι δείχνει και πώς να το αποκρυπτογραφήσετε μόνοι σας.

Τι είδους μελέτη είναι αυτή - μια εξέταση αίματος για ELISA; Η συντομογραφία σημαίνει ενζυμική ανοσοδοκιμασία, κατά την οποία προσδιορίζεται η ποσοτική και ποιοτική περιεκτικότητα διαφόρων βιολογικά δραστικών ουσιών, καθώς και τα αντισώματα και τα αντιγόνα σε βιολογικό υλικό.

Τι χρησιμοποιείται στην ενζυμική ανοσοδοκιμασία:

• εγκεφαλονωτιαίο υγρό;
• βλέννα της ουρήθρας, του τραχήλου της μήτρας.
• αμνιακό υγρό;
• περιεχόμενο του υαλοειδούς.

Η ενζυμική ανοσοδοκιμασία συνταγογραφείται για τη διάγνωση σεξουαλικά μεταδιδόμενων ασθενειών, μολυσματικών και ογκολογικών διεργασιών, αλλεργικές αντιδράσεις, διαταραχές στην εργασία του ενδοκρινικού και αναπαραγωγικού συστήματος, αυτοάνοσες και ανοσοανεπάρκειες ασθένειες, καθώς και για την αξιολόγηση του κινδύνου ανάπτυξης ορισμένων νεφρών.

Μια εξέταση αίματος για ELISA κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης συνταγογραφείται με σκοπό την έγκαιρη ανίχνευση, τις αναπτυξιακές διαταραχές στα αρχικά στάδια και τον έλεγχο της δυναμικής τους. Επιπλέον, η ανάλυση ELISA σάς επιτρέπει να ελέγχετε το επίπεδο των αντισωμάτων που μπορούν να προκαλέσουν την ανάπτυξη σοβαρών νευρολογικών διαταραχών σε ένα παιδί, αποτρέποντας έτσι την ανάπτυξη επιπλοκών όχι μόνο κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης, αλλά και κατά τον τοκετό.

Καθιστά δυνατή την εκ των προτέρων ανταπόκριση σε εντοπισμένα προβλήματα και βελτιώνει σημαντικά την υγεία τόσο της ίδιας της μητέρας όσο και του μωρού της.

Τα οφέλη της ELISA αίματος περιλαμβάνουν:

• υψηλός (έως 90%) βαθμός ευαισθησίας.
• τη δυνατότητα έγκαιρης διάγνωσης, με ταυτόχρονο προσδιορισμό του σταδίου της νόσου.
• χαμηλό κόστος αντιδραστηρίων και, κατά συνέπεια, διαθεσιμότητα.
• την ελάχιστη ποσότητα υλικού για έρευνα·
• ελάχιστοι όροι παραλαβής·
• τη δυνατότητα μακροχρόνιας αποθήκευσης αντιδραστηρίων·
• την ικανότητα ελέγχου της δυναμικής της ανάπτυξης της παθολογικής διαδικασίας.

Δοκιμαστικά συστήματα

Μειονεκτήματα της ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας:

• είναι αδύνατο να προσδιοριστεί ο αιτιολογικός παράγοντας της νόσου, στο εργαστήριο λαμβάνουν μόνο μια ανοσολογική απάντηση σε αυτήν
• η πιθανότητα λήψης ψευδούς αποτελέσματος (σε πολύ σπάνιες περιπτώσεις, κυρίως κατά την περίοδο της κύησης).

Εκπαίδευση

Η αρχή αυτού του τύπου εξέτασης αίματος βασίζεται στο σχηματισμό ειδικών αντισωμάτων στο ανθρώπινο σώμα όταν εισέρχονται αντιγόνα, δηλαδή ξένοι παράγοντες, προκαλώντας ανάπτυξητη μια ή την άλλη ασθένεια. Ως αποτέλεσμα της αλληλεπίδρασής τους, σχηματίζονται σύμπλοκα «αντιγόνου-αντισώματος», τα οποία υποβάλλονται σε έρευνα για την εφαρμογή της ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας.

Από αυτή την άποψη, για να μην επηρεαστούν αυτά τα σύμπλοκα και, κατά συνέπεια, η αξιοπιστία των αποτελεσμάτων που λαμβάνονται, μια εξέταση αίματος και άλλο βιολογικό υλικό για ELISA απαιτεί κάποια προετοιμασία.

Επίσης, 14 ημέρες πριν την προτεινόμενη εξέταση, αναστέλλεται η ειδική θεραπεία και η χρήση αντιβακτηριακών, αντιικών φάρμακασταματά.

Το αίμα για την ELISA λαμβάνεται από μια φλέβα. Αμέσως πριν την αιμοληψία, περιορίστε φυσική άσκησηκαι αποφύγετε το κάπνισμα και την κατανάλωση αλκοόλ.

Υπάρχουν διάφορες τεχνικές και μέθοδοι για τη διεξαγωγή της ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας: άμεση και έμμεση μέθοδος, ανταγωνιστική μέθοδος και μέθοδος αποκλεισμού.

Η βάση της εξέτασης του αίματος (οποιουδήποτε άλλου βιολογικού υλικού) στο ELISA είναι ένας αλγόριθμος που συνίσταται στην υλοποίηση δύο αντιδράσεων - ανοσολογικών και ενζυματικών.

Κατά την πρώτη, παθολογικοί παράγοντες συνδέονται με τα προστατευτικά στοιχεία των κυττάρων του βιολογικού υλικού που λαμβάνεται για τη μελέτη. Σχηματίζεται ένα ανοσοσύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος. Μοιάζει με αυτό. Τα αντιγόνα υπάρχουν στην επιφάνεια όλων των κυττάρων.

Όταν ξένα κύτταρα εισέρχονται στο σώμα, συλλαμβάνονται από κύτταρα του ανοσοποιητικού (στις επιφάνειες των οποίων βρίσκονται τα αντισώματα), τα οποία συγκρίνουν τα δεδομένα αντιγόνου από την επιφάνεια των νεοαφιχθέντων κυττάρων με πληροφορίες που είναι αποθηκευμένες στη δική τους «μνήμη». Σε περίπτωση ασυμφωνίας μεταξύ αυτών των δεδομένων, περιλαμβάνονται οι προστατευτικές λειτουργίες του σώματος, οι οποίες συνίστανται στον σχηματισμό ανοσολογικού συμπλέγματος.

Μετά από αυτό, πραγματοποιείται μια ενζυματική αντίδραση, η οποία οπτικοποιεί τα αποτελέσματα της προηγούμενης αντίδρασης. Η αρχή του βασίζεται στη μετατροπή της ύλης από το ένα στο άλλο. Για κάθε τύπο ELISA που σχηματίζεται κατά την ανοσολογική αντίδραση του υλικού, υπάρχει ένα συγκεκριμένο ένζυμο, η επεξεργασία του οποίου χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης ενός ξένου παράγοντα (από την ένταση της χρώσης του διαλύματος).

Αποκρυπτογράφηση

Χάρη σε μια εξέταση αίματος για ELISA, οι εργαστηριακοί βοηθοί καθορίζουν τα A, G και M. Ένα θετικό αποτέλεσμα στη μελέτη αίματος (άλλες βιολογικές πρώτες ύλες) για ELISA καθιστά δυνατή όχι μόνο τη διάγνωση, αλλά και το στάδιο της νόσου , καθώς και τη φύση της πορείας του (οξεία ή χρόνια).

Αυτές οι ανοσοσφαιρίνες με την παρουσία μιας παθολογικής διαδικασίας στο σώμα του ασθενούς σχηματίζονται σε διαφορετικές περιόδους της νόσου:

• Ανοσοσφαιρίνες Μ, IgM- σχηματίζονται πέντε ημέρες μετά την έναρξη της νόσου και παραμένουν στο αίμα για 1,5 μήνα, μετά τον οποίο εξαφανίζονται. Η ανίχνευση της IgM υποδηλώνει την παρουσία μιας οξείας πρωτοπαθούς παθολογικής διαδικασίας στον οργανισμό και την ανάγκη για ενισχυμένη θεραπευτική παρέμβαση.
• Ανοσοσφαιρίνες G, IgG- εμφανίζονται τέσσερις εβδομάδες μετά τη μόλυνση, η παρουσία τους στο σώμα μπορεί να ανιχνευθεί για αρκετούς μήνες. Η ανίχνευση της IgG υποδεικνύει την παρουσία προηγούμενης ασθένειας ενός ατόμου στο ιστορικό. Η αύξηση του περιεχομένου τους μπορεί επίσης να υποδηλώνει επαναμόλυνση.
• Ανοσοσφαιρίνες Α, IgA- εμφανίζονται τη στιγμή της μόλυνσης και υπάρχουν στο σώμα για τέσσερις εβδομάδες. Η μείωση του περιεχομένου τους υποδηλώνει την έναρξη της ανάκαμψης. Η εμφάνιση ξανά στις αναλύσεις αφού το άτομο έχει υποβληθεί σε θεραπεία και έχει αναρρώσει, υποδηλώνει τη μετάβαση της νόσου σε χρόνια μορφή. Η ταυτόχρονη ανίχνευση IgA και IgG στα αποτελέσματα της ELISA υποδηλώνει επίσης την παρουσία χρόνιας διαδικασίας στον οργανισμό.

Θα πρέπει επίσης να σημειωθεί ότι η ταυτόχρονη παρουσία IgG και IgM στις αναλύσεις υποδηλώνει ότι η χρόνια διαδικασία έχει επιδεινωθεί και ο ασθενής πρέπει να ξεκινήσει θεραπεία. Εάν καμία από τις ανοσοσφαιρίνες δεν ανιχνεύθηκε κατά την εξέταση, αυτό σημαίνει την απουσία ανοσοαπόκρισης.

Αντιπροσωπεύοντας έναν σύγχρονο τύπο εργαστηριακής έρευνας, το ELISA, ή την ενζυμική ανοσοδοκιμασία, σας επιτρέπει να βρείτε συγκεκριμένα αντισώματα ή αντιγόνα στο αίμα για ορισμένες ασθένειες. Αυτό σας επιτρέπει να εντοπίσετε τόσο την αιτιολογία της νόσου όσο και να προσδιορίσετε το στάδιο της. Ταυτόχρονα, τα αποτελέσματα αυτής της έρευνας μπορούν να εκδοθούν τόσο ποσοτικά όσο και ποιοτικά. Ας εξετάσουμε λοιπόν λεπτομερώς την αρχή της μεθόδου ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας, τη μεθοδολογία και την ουσία της.

Τι είναι η ενζυμική ανοσοδοκιμασία

Ορισμένος για την πληρέστερη ολοκληρωμένη αξιολόγηση της κατάστασης της υγείας, η ενζυμική ανοσοδοκιμασία σάς επιτρέπει να αξιολογήσετε τη γενική κατάσταση της υγείας και να αξιολογήσετε τις προστατευτικές της λειτουργίες. Αυτή η εργαστηριακή μελέτη σάς επιτρέπει να διαγνώσετε μολυσματικές, αυτοάνοσες, αιματολογικές παθολογίες σε μια εξέταση αίματος.

Η ουσία της ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας συζητείται στο παρακάτω βίντεο:

Σε ποιον ανατίθεται

Αυτή η μελέτη μπορεί να ανατεθεί σε εκείνους τους ασθενείς που έχουν τις ακόλουθες ασθένειες:

• ασθένειες ιογενούς προέλευσης, οι οποίες περιλαμβάνουν ηπατίτιδα.
• σεξουαλικά μεταδιδόμενα νοσήματα - χλαμύδια, τριχομονάδα, σύφιλη, ουρεόπλασμα, μυκόπλασμα.
• ανοσοανεπάρκεια?
• προεγχειρητική ολοκληρωμένη εξέταση.

Μια εξέταση αίματος ELISA συνταγογραφείται επίσης για τον προσδιορισμό του επιπέδου των ορμονών και την αξιολόγηση της ποιότητας του είδους της θεραπείας που διεξάγεται.

Ο γιατρός μπορεί να συνταγογραφήσει αυτήν την ανάλυση για να καθορίσει το στάδιο της υπάρχουσας νόσου, η οποία επιτρέπει έγκαιρες προσαρμογές στη θεραπεία που χρησιμοποιείται. Και η υψηλή ακρίβεια των δεδομένων που λαμβάνονται σας επιτρέπει να έχετε την πιο λεπτομερή εικόνα της υγείας. Ταυτόχρονα, η απόκτηση δεδομένων μετά τη μελέτη πραγματοποιείται σε πολύ σύντομο χρονικό διάστημα, γεγονός που καθιστά δυνατή την παρακολούθηση της δυναμικής της εξέλιξης της παθολογικής διαδικασίας.

Γιατί να κάνετε αυτές τις εξετάσεις;

Δεδομένου ότι χάρη στην εξέταση αίματος ELISA, μπορείτε να λάβετε σημαντικές πληροφορίες σχετικά με την κατάσταση της υγείας και τις παθολογικές διεργασίες που συμβαίνουν στο σώμα, είναι αυτό που καθιστά δυνατό να ληφθούν πλήρως υπόψη τα αρχικά δεδομένα (γενική υγεία, στάδιο της νόσου, δυναμική της ανάπτυξης της παθολογικής διαδικασίας, δείκτης της αποτελεσματικότητας της θεραπείας που χρησιμοποιείται) κατά τη σύνταξη θεραπευτικών σχημάτων.

Για το λόγο αυτό, προκειμένου να επιτευχθεί το πιο έντονο αποτέλεσμα της θεραπείας και ο ταχύτερος τερματισμός της παθολογικής διαδικασίας στο σώμα, συνταγογραφείται εξέταση αίματος ELISA. Σοβαρές ασθένειες του ανοσοποιητικού συστήματος, η παρουσία αντιγόνων στο αίμα και τα αίτια των αλλεργιών, με βάση τα ληφθέντα δεδομένα, μπορούν να θεραπευτούν πιο γρήγορα, χρησιμοποιώντας τις πιο αποτελεσματικές μεθόδους.

Ο διορισμός μιας ανάλυσης ELISA πραγματοποιείται για μια ποικιλία παθολογιών και θα πρέπει να γίνεται μόνο σύμφωνα με τις οδηγίες του γιατρού. Η συχνότητα της ανάλυσης ορίζεται επίσης από τον γιατρό και κατά την αιμοδοσία για ανάλυση ELISA, η εικόνα της νόσου είναι η πιο πλήρης. Δεδομένου ότι είναι δυνατό να ληφθεί η δυναμική της πορείας της νόσου περνώντας αυτήν την ανάλυση περισσότερες από μία φορές, οι αιμοδοσίες από τρεις έως πέντε φορές μπορούν να συνταγογραφηθούν συχνότερα. Αυτό καθιστά δυνατή τη σύγκριση της ποσότητας των αντισωμάτων στο αίμα σε διαφορετικά χρονικά διαστήματα.

Τύποι τέτοιας διαδικασίας

Υπάρχουν διάφοροι τύποι ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας. Διαφέρουν ως προς τον τύπο του υγρού που λαμβάνεται από το ανθρώπινο σώμα, βάσει του οποίου μελετάται η σύστασή του και η παρουσία ορισμένων αντιγόνων.

Ταυτόχρονα, όχι μόνο ανθρώπινο αίμα, αλλά και άλλα υγρά μπορούν να ληφθούν για ανάλυση:

• αμνιακό υγρό,
• εγκεφαλονωτιαίο υγρό,
• περιεχόμενο του υαλοειδούς
• επιχρίσματα,
• βλέννα από την ουρήθρα και τον αυχενικό σωλήνα.

Η ίδια η επέμβαση για τη λήψη ενός συγκεκριμένου τύπου υγρού είναι τυπική και πραγματοποιείται σε νοσοκομείο ημέρας.

Ενδείξεις για κράτημα

Συνήθως, μια ανάλυση ELISA συνταγογραφείται από γιατρό εάν είναι απαραίτητο να ληφθεί μια λεπτομερής εικόνα της τρέχουσας νόσου, η οποία λαμβάνει χώρα σε οποιαδήποτε μορφή: χρόνια, υποτονική ή οξεία. Και οι ακόλουθες συνθήκες και θεραπευτικοί στόχοι μπορούν να θεωρηθούν ενδείξεις για αυτόν τον τύπο ανάλυσης:

• αναζήτηση αντιγόνων ορισμένων ασθενειών.
• προσδιορισμός της ορμονικής κατάστασης.
• ανίχνευση του ιού της ηπατίτιδας στο σώμα.
• έρευνα σε;
• αναζήτηση αντισωμάτων για κάθε είδους μολυσματικές ασθένειες.
• εξέταση για την παρουσία αυτοάνοσων βλαβών του σώματος.

Για μια ενζυμική ανοσοδοκιμασία, δείτε το παρακάτω βίντεο:

Αντενδείξεις για κράτημα

Αντενδείξεις για την ενζυμική ανοσοδοκιμασία δεν έχουν εντοπιστεί μέχρι σήμερα.

Κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης, όταν υπάρχει μια συνεχής αλλαγή στην περιεκτικότητα των ορμονών στο αίμα, είναι απαραίτητο να διεξάγετε επανειλημμένα αυτή την ανάλυση για να επιβεβαιώσετε το αποτέλεσμα. Τα νεογνά και τα βρέφη μπορεί επίσης να έχουν λανθασμένα δεδομένα εξετάσεων: κατά τη διάρκεια της εμβρυϊκής ανάπτυξης, ορισμένοι τύποι αντισωμάτων μπορούν να εισέλθουν στο αίμα του εμβρύου μέσω του πλακούντα της μητέρας. Επομένως, η παρουσία τους στη ληφθείσα ανάλυση δεν θα πρέπει να θεωρείται σημάδι υπάρχουσας μόλυνσης.

Δοκιμή ασφάλειας

Η διενέργεια της διαδικασίας λήψης οποιουδήποτε είδους υγρού από τον ανθρώπινο οργανισμό δεν επιφέρει αρνητικές επιπτώσεις στον οργανισμό. Η πλήρης στειρότητα κατά τη διάρκεια των χειρισμών αποφεύγει την πιθανότητα μόλυνσης από οποιοδήποτε είδος ασθένειας.

Προετοιμασία για την εκδήλωση

Για να αποκτήσετε τα πιο αξιόπιστα αποτελέσματα της μελέτης, θα πρέπει να αποφύγετε να πίνετε αλκοολούχα ποτά και ναρκωτικά πριν πάρετε αίμα (ή άλλο υγρό) για ανάλυση.

Πώς είναι η διαδικασία, αισθήσεις κατά τη διάρκεια της

Για τη διεξαγωγή μιας δοκιμής ELISA, το αίμα του ασθενούς λαμβάνεται αυστηρά με άδειο στομάχι: δεν πρέπει να τρώτε φαγητό σε οποιαδήποτε μορφή τουλάχιστον μία ώρα πριν από τη διαδικασία. Η ανάλυση λαμβάνεται από την κοιλιακή φλέβα.

Η παρουσία οποιωνδήποτε ασθενειών και τα φάρμακα που λαμβάνονται αναφέρονται στον γιατρό εκ των προτέρων, τις περισσότερες φορές τα φάρμακα κατά τη στιγμή της αιμοδοσίας θα ακυρώνονται. Τα συναισθήματα κατά τη διάρκεια της διαδικασίας είναι παρόμοια με τη λήψη αίματος για βιοχημική ανάλυση.

Αποκρυπτογράφηση των αποτελεσμάτων

Η διάγνωση ELISA σάς επιτρέπει να προσδιορίσετε την παρουσία μόλυνσης στο σώμα, τη δραστηριότητα της παθολογικής διαδικασίας και την αιτιολογία της υπάρχουσας μόλυνσης. Η ταχεία λήψη του αποτελέσματος της ανάλυσης (εντός μιας ημέρας) είναι ένα από τα πλεονεκτήματα αυτού του τύπου μελέτης.

Η διαδικασία αποκωδικοποίησης των πληροφοριών που λαμβάνονται πραγματοποιείται από τον γιατρό. Ταυτόχρονα, θα πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι η ορθότητα των αποτελεσμάτων που λαμβάνονται για τη δυναμική οποιωνδήποτε διεργασιών είναι εγγυημένη κατά τη διεξαγωγή αναλύσεων σε ένα εργαστήριο.

Μέσο κόστος της διαδικασίας

Η μέση τιμή μιας μελέτης ELISA εξαρτάται από την κατεύθυνση της ανάλυσης και τον προσδιορισμό συγκεκριμένων τιμών. Έτσι, ο προσδιορισμός ορολογικών δεικτών μεταδοτικές ασθένειεςδιαφορετικοί τύποι (anti-HAV IgG, anti-HAV IgM, HBsAg) θα κοστίζουν από 200 έως 320 ρούβλια και πραγματοποιείται εντός 2 εργάσιμων ημερών. Ο δείκτης του κόστους αυτής της διαδικασίας θεωρείται επίσης το πλεονέκτημά της: η διαθεσιμότητα τιμών για κάθε είδους έρευνα επιτρέπει τη διεξαγωγή έρευνας με οποιοδήποτε προϋπολογισμό.

Το κόστος μιας μελέτης ELISA εξαρτάται από την πολιτική ιατρικό ίδρυμα, ωστόσο, θα πρέπει να θεωρείται μια δημόσια διαδικασία που σας επιτρέπει να αποκτήσετε μια λεπτομερή εικόνα της υπάρχουσας νόσου και να παρέχετε την πιο ολοκληρωμένη θεραπεία.

Σχετικά με τους κανόνες και τα χαρακτηριστικά της μελέτης ELISA, δείτε το παρακάτω βίντεο:

Για μια ολοκληρωμένη αξιολόγηση της κατάστασης του σώματος (ιδίως των προστατευτικών του λειτουργιών), συνταγογραφείται μια ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (ELISA). Η εξέταση αίματος ELISA πραγματοποιείται για τη διάγνωση λοιμωδών, αυτοάνοσων, αιματολογικών παθολογιών, πρωτοπαθών και δευτερογενών ανοσοανεπάρκειων. Σε αυτό το άρθρο, προτείνουμε να εξετάσουμε λεπτομερέστερα τι είναι μια εξέταση αίματος ELISA, καθώς και ποιες ενδείξεις υπάρχουν για την εφαρμογή της.

Ενδείξεις για το διορισμό εξέτασης αίματος από την ELISA και η αρχή της δράσης της

Όπως έχουμε ήδη σημειώσει, η εξέταση αίματος ELISA είναι μια εργαστηριακή εξέταση με την οποία προσδιορίζονται αντιγόνα ή αντισώματα σε δείγμα αίματος. Αυτή η ανάλυση χρησιμοποιείται για την ανίχνευση του επιπέδου των ορμονών, των ανοσολογικών συμπλεγμάτων και των ανοσοσφαιρινών. Υπάρχουν οι ακόλουθες ενδείξεις για την παράδοση μιας ανάλυσης ELISA:

• Διάγνωση αλλεργίας.
• Διάγνωση ασθενειών ιογενούς προέλευσης - Ιός Epstein-Barr, έρπης, ηπατίτιδα, κυτταρομεγαλοϊός.
• Διάγνωση σεξουαλικά μεταδιδόμενων λοιμώξεων - μυκόπλασμα, ουρεόπλασμα, σύφιλη, τριχομονάδα, χλαμύδια.
• Ορισμός ανοσοανεπάρκειας.
• Διαγνωστικά ογκολογικών παθολογιών.
• Αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας της θεραπείας.
• Προσδιορισμός των επιπέδων ορμονών.
• Προεγχειρητική ολοκληρωμένη εξέταση.

Η αρχή της δράσης μιας ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας βασίζεται σε μια εξέταση αίματος για την παρουσία ανοσοσφαιρινών (ειδικά πρωτεϊνικά αντισώματα). Οι ανοσοσφαιρίνες παράγονται από το ανοσοποιητικό σύστημα όταν εισέρχονται αντιγόνα (ξένοι μικροοργανισμοί) στο ανθρώπινο σώμα. Αυτά τα άνοσα μόρια συνδέονται με διάφορους μολυσματικούς παράγοντες και τους εξουδετερώνουν. Ένα σημαντικό διακριτικό χαρακτηριστικό που διαθέτουν οι ανοσοσφαιρίνες είναι η ειδικότητά τους. Λόγω αυτών των χαρακτηριστικών, μπορούν να σχηματίσουν ένα σύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος δεσμεύοντας σε ένα συγκεκριμένο αντιγόνο. Κατά την εξέταση αίματος ELISA, αυτό το σύμπλεγμα προσδιορίζεται ποσοτικά και ποιοτικά.

Για τη μελέτη αυτή, χρησιμοποιείται συχνά ανθρώπινο αίμα. Ωστόσο, ως υλικό για ανάλυση, μπορείτε να πάρετε τα περιεχόμενα του υαλοειδούς σώματος, του αμνιακού υγρού, του εγκεφαλονωτιαίου υγρού. Το δείγμα αίματος λαμβάνεται συνήθως από την κυλινδρική φλέβα του ασθενούς. Συνιστάται η αιμοδοσία με άδειο στομάχι (πρέπει να περάσουν τουλάχιστον 12 ώρες από το τελευταίο γεύμα). Εάν ο ασθενής λάβει φάρμακαπρέπει να αναφέρονται στον γιατρό, καθώς ορισμένα από αυτά μπορεί να επηρεάσουν το αποτέλεσμα της ανάλυσης. Επίσης, η αξιοπιστία των αποτελεσμάτων των εξετάσεων επηρεάζεται από τη χρήση ναρκωτικών και αλκοόλ.

Αποκρυπτογράφηση μιας εξέτασης αίματος για ELISA

Η μορφή αυτής της ανάλυσης συνήθως υποδεικνύει αρνητικό (-) ή θετικό (+) αποτέλεσμα του υπολογισμού κάθε κατηγορίας ανοσοσφαιρινών.

Προτείνουμε να εξετάσουμε την ερμηνεία της πιθανής αποκωδικοποίησης μιας εξέτασης αίματος για ELISA.

• Τα IgG, IgA δεν ανιχνεύονται και το αποτέλεσμα του IgM είναι αρνητικό - πλήρης ανάρρωση.
• Το αποτέλεσμα των IgM, IgA, IgG είναι αρνητικό - δεν υπάρχει ανοσία στη μόλυνση.
• Το αποτέλεσμα IgG, IgA θετικό και αρνητικό, καθώς και το αποτέλεσμα IgM θετικό - η παρουσία οξείας λοίμωξης.
• Θετικό αποτέλεσμα IgG και αρνητικό αποτέλεσμα IgA και IgM - ανοσία μετά τον εμβολιασμό ή μετά τη μόλυνση.
• Ένα θετικό ή αρνητικό αποτέλεσμα IgG, IgA και αρνητικό IgM είναι μια χρόνια λοίμωξη.
• Το αποτέλεσμα των IgG, IgM, IgA είναι θετικό - έξαρση χρόνιας λοιμώδους παθολογίας.

Στην ενζυμική ανοσοδοκιμασία, εκτός από την αποσαφήνιση των τάξεων των αντισωμάτων, οι ποσοτικοί δείκτες τους υποδεικνύονται στο αντίγραφο. Ωστόσο, μόνο ο θεράπων ιατρός δίνει μια εκτενή εξήγηση για αυτά.

Πλεονεκτήματα και μειονεκτήματα αυτής της μελέτης

• Σχετικά χαμηλό κόστος.
• Ευκολία στη χρήση.
• Δυνατότητα διάγνωσης πρώιμο στάδιούποπτη ασθένεια.
• Σχετικά υψηλή ακρίβεια των ληφθέντων δεδομένων.
• Ένα σύντομο χρονικό διάστημα που απαιτείται για να ληφθούν τα αποτελέσματα της μελέτης.
• Η ικανότητα παρακολούθησης της δυναμικής ανάπτυξης μολυσματική διαδικασίαστον οργανισμό.
• Υψηλό επίπεδο ενοποίησης, που καθιστά δυνατή τη διεξαγωγή μαζικών ερευνών.
• Αυτοματοποίηση όλων των σταδίων έρευνας.

Το μειονέκτημα μιας εξέτασης αίματος ELISA είναι ότι μπορεί, σε σπάνιες περιπτώσεις, να δώσει ψευδώς θετικά ή ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα. Επίσης, κατά τη διεξαγωγή μιας μελέτης, εκτός από τεχνικά λάθη, η αιτία ψευδών αποτελεσμάτων σε έναν ασθενή μπορεί να είναι ένας ρευματοειδής παράγοντας, η παρουσία χρόνιων ασθενειών (στις οποίες παράγονται αντισώματα), η λήψη ορισμένων φαρμάκων και οι μεταβολικές διαταραχές.

• Γιαρδιάση.
• Ασκαρίαση.
• Κυστικέρκωση.
• Αμοιβασία.
• Τριχίνωση - η μελέτη πραγματοποιείται περισσότερες από μία φορές, σε 4-12 εβδομάδες μετά τη μόλυνση, προσδιορίζεται το μέγιστο επίπεδο αντισωμάτων.
• Τενίαση.
• Οπιθωρχίαση - πραγματοποιήστε διαφορική διάγνωση μεταξύ οξείας και χρόνια μορφήασθένεια.
• Τοξοπλάσμωση.
• Fascioliasis - στο οξύ στάδιο της νόσου, προσδιορίζεται η παρουσία αντισωμάτων.
• Δερματική ή σπλαχνική λεϊσμανίαση.

Έτσι, μπορούμε να συνοψίσουμε: είναι απαραίτητο να περάσει ένα τεστ ELISA για παράσιτα για την ανίχνευση αντιγόνων (απόβλητα των παρασίτων και την ίδια τους την παρουσία), καθώς και αντισώματα (ανοσοσφαιρίνες). Ιδιαιτερότητα αυτή τη μέθοδοΗ έρευνα για τον προσδιορισμό των παρασίτων σύμφωνα με στατιστικά στοιχεία είναι περίπου 90%. Χάρη σε αυτή την ανάλυση, ο γιατρός μπορεί να προσδιορίσει με ακρίβεια τον τύπο των παρασίτων, τον συνολικό αριθμό τους και επίσης να εντοπίσει τη δυναμική της ανάπτυξης. παθολογικές διεργασίεςχάρη στο επίπεδο των αντισωμάτων.

Τις περισσότερες φορές στην πράξη, χρησιμοποιούνται τρεις παραλλαγές ανοσοδοκιμασίας στερεάς φάσης - έμμεση ανοσοδοκιμασία, άμεση ανοσοδοκιμασία και ανοσοδοκιμασία τύπου σάντουιτς. Οι διαφορές μεταξύ αυτών των τύπων ανοσοπροσδιορισμών είναι οι εξής. Στην έμμεση εκδοχή της ανοσοδοκιμασίας, το αντιγόνο απορροφάται στην επιφάνεια των φρεατίων μιας πλάκας πολυστυρενίου στο πρώτο στάδιο. Μετά την απομάκρυνση των μη δεσμευμένων μορίων αντιγόνου, προστίθεται ένα δείγμα που περιέχει αντισώματα ειδικά για αυτό το αντιγόνο. Τα προκύπτοντα σύμπλοκα αντιγόνου-αντισώματος ανιχνεύονται χρησιμοποιώντας αντισώματα αντι-ειδών συζευγμένα σε μια ετικέτα (Εικ. 1Α). Στην άμεση έκδοση της ανοσοδοκιμασίας, η ανίχνευση του προσροφημένου αντιγόνου πραγματοποιείται απευθείας με τη βοήθεια ειδικών αντισωμάτων συζευγμένων με την ετικέτα (Εικ. 1Β). Σε μια ανοσοδοκιμασία τύπου σάντουιτς, στο πρώτο στάδιο, δεν είναι το αντιγόνο που προσροφάται στην επιφάνεια της πλάκας, αλλά αντισώματα ειδικά για το υπό μελέτη αντιγόνο (αντισώματα υποστρώματος). Μετά την απομάκρυνση των μη δεσμευμένων μορίων αντισώματος, προστίθεται ένα δείγμα που περιέχει το αντιγόνο. Για την ανίχνευση του σχηματισμένου συμπλόκου υποστρώματος-αντισώματος, προστίθενται δεύτερα αντισώματα ειδικά σε άλλο, χωρικά απομακρυσμένο επίτοπο αντιγόνου, συζευγμένο με κάποια επισήμανση (Εικ. 1Β). Η χρήση αντισωμάτων τύπου σάντουιτς ειδικών για δύο διαφορετικούς επιτόπους ενός αντιγόνου σε μια ανοσοδοκιμασία καθιστά δυνατή την επίτευξη υψηλής ευαισθησίας και ειδικότητας στον προσδιορισμό του αντιγόνου ακόμη και σε τέτοια ετερογενή δείγματα όπως το πλάσμα αίματος.

Ρύζι. 1. Αρχή της έμμεσης (Α), της άμεσης (Β) και της ανοσοδοκιμασίας τύπου σάντουιτς (C)

Έμμεση ενζυμική ανοσοδοκιμασία (έμμεση ELISA)

Η μέθοδος της έμμεσης ανοσοδοκιμασίας χαρακτηρίζεται από την εφαρμογή μιας διαδικασίας 3 σταδίων, στο πρώτο στάδιο της οποίας το αντιγόνο προσροφάται σε ειδικά παρασκευασμένο πλαστικό, στο δεύτερο στάδιο τα ειδικά αντισώματα αλληλεπιδρούν με το αντιγόνο και στο τρίτο στάδιο το αντιγόνο. -Εισάγονται αντισώματα ειδών στο σύστημα, συζευγμένα με ένα ένζυμο που καθορίζει την ενζυματική αντίδραση δείκτη. Σε αυτή τη μέθοδο, η υπεροξειδάση χρένου χρησιμοποιείται ως ένζυμο. Η αντίδραση πραγματοποιείται σε ειδικές πλάκες 96 φρεατίων.

Ι. Απορρόφηση αντιγόνου

Τα φρεάτια μιας πλάκας ανοσοδοκιμασίας 96 φρεατίων προσροφούν 0,1-0,5 μg αντιγόνου ανά φρεάτιο σε 100 μl φυσιολογικού ορού ρυθμισμένου με φωσφορικά (PBS). Η επώαση πραγματοποιείται για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου και ανακινείται σε οριζόντιο αναδευτήρα πλάκας. Η πλύση (2 φορές) των μη δεσμευμένων μορίων αντιγόνου πραγματοποιείται με φυσιολογικό ορό ρυθμισμένο με φωσφορικά που περιέχει 0,1% Tween-20 (PBST).

II. μπλοκάρισμα

Για τον αποκλεισμό των μη ειδικών θέσεων δέσμευσης, τα φρεάτια του δισκίου γεμίζονται με PBST και επωάζονται για 10-15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου.

III. Ρουτίνα ειδικών αντισωμάτων

Ο έλεγχος μπορεί να πραγματοποιηθεί τόσο σε οριζόντιες όσο και σε κάθετες σειρές του tablet. Θα πρέπει να σημειωθεί ότι η κονιοποίηση αντισωμάτων πραγματοποιείται εάν είναι απαραίτητο να επιλεγεί η βέλτιστη συγκέντρωση αντισωμάτων ή να προσδιοριστεί ο τίτλος. Σε περίπτωση που προσδιοριστεί η βέλτιστη συγκέντρωση ή/και τίτλος αντισωμάτων, τότε χρησιμοποιείται η αραίωση που συνιστάται για αυτά τα συγκεκριμένα αντισώματα.

Κατά τη λειοτρίβηση, εισάγεται μια έτοιμη αραίωση αντισωμάτων στο πρώτο φρεάτιο της σειράς - κατά μέσο όρο 1-10 μg ανά φρεάτιο, στη συνέχεια πραγματοποιείται διαδοχική αραίωση αντισωμάτων στα φρεάτια. Η επώαση με ειδικά αντισώματα πραγματοποιείται για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου και ανακίνηση σε οριζόντιο αναδευτήρα πλάκας. Το πλύσιμο πραγματοποιείται με PBST 3 φορές.

IV. Προσθήκη αντισωμάτων κατά του είδους συζευγμένα με ενζυμική επισήμανση

Ως ανιχνευτικά (δευτερεύοντα) αντισώματα, χρησιμοποιούνται πολυκλωνικά αντισώματα κατά του είδους συζευγμένα με υπεροξειδάση χρένου. Τις περισσότερες φορές, χρησιμοποιούνται αντισώματα κατσίκας ή κουνελιού, ειδικά για ολόκληρο το μόριο ή για θραύσματα Fc ειδικών αντισωμάτων. Η συγκέντρωση των αντισωμάτων ανίχνευσης συνήθως υποδεικνύεται από τον κατασκευαστή ως αραίωση του αρχικού διαλύματος (για παράδειγμα, 1:1000). Η επώαση με δευτερεύοντα αντισώματα πραγματοποιείται για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου και ανακινείται σε οριζόντιο αναδευτήρα πλάκας. Το πλύσιμο πραγματοποιείται με PBST 5-6 φορές.

Η υπεροξειδάση του χρένου καταλύει την αντίδραση της οξείδωσης του υποστρώματος με το υπεροξείδιο του υδρογόνου. Η Ο-φαινυλενοδιαμίνη (OPD) χρησιμοποιείται ως υπόστρωμα για την υπεροξειδάση χρένου. Ως αποτέλεσμα της αντίδρασης, σχηματίζεται ένα έγχρωμο προϊόν οξείδωσης OPD.

Διάλυμα υποστρώματος: Σε 10 ml ρυθμιστικού διαλύματος υποστρώματος (ρυθμιστικό διάλυμα κιτρικού Na-0,1 M, pH 4,5) προσθέστε 0,01 ml υπεροξειδίου του υδρογόνου 30% και 0,2 ml διαλύματος 50x OFD (340 mg OFD σε 10 ml εθυλική αλκοόλη; αποθηκεύεται στους -20°C).

Η επώαση πραγματοποιείται για 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου και ανακινείται σε οριζόντιο αναδευτήρα πλάκας.

V. Διακοπή της Ενζυματικής Αντίδρασης

VI. Μέτρηση οπτικής πυκνότητας

Άμεση ενζυμική ανοσοδοκιμασία (άμεση ELISA)

Η μέθοδος της άμεσης ανοσοδοκιμασίας έχει μόνο μικρές διαφορές σε σύγκριση με τη μέθοδο της έμμεσης ανοσοδοκιμασίας. Έτσι, τα βήματα I και II είναι τα ίδια και στους δύο τύπους ανάλυσης. Η διαφορά έγκειται στο γεγονός ότι στην άμεση έκδοση της ανοσοδοκιμασίας σταδίου III, χρησιμοποιούνται ειδικά αντισώματα συζευγμένα με ενζυμική επισήμανση. Εάν είναι απαραίτητο, είναι επίσης δυνατό να πραγματοποιηθεί κονιοποίηση ειδικών αντισωμάτων συζευγμένων με ενζυμική επισήμανση, παρόμοια με εκείνη που περιγράφηκε προηγουμένως για μη συζευγμένα αντισώματα. Το στάδιο IV παραλείπεται και περαιτέρω στάδια (V-VII) διεξάγονται με τον ίδιο τρόπο όπως περιγράφηκε παραπάνω για την έμμεση παραλλαγή της ανοσοδοκιμασίας.

Ανοσοπροσδιορισμός τύπου σάντουιτς

Ρύζι. 2. Σχηματική αναπαράσταση της ανοσοδοκιμασίας τύπου «σάντουιτς». Το ATp είναι το αντίσωμα υποστρώματος, το ATd είναι το αντίσωμα ανίχνευσης, το AG είναι το αντιγόνο, το M είναι η ετικέτα που συνδέεται ομοιοπολικά με το αντίσωμα ανίχνευσης, το P είναι το υπόστρωμα πάνω στο οποίο προσροφάται το αντίσωμα υποστρώματος.

Σε αυτή την παραλλαγή της ανοσοδοκιμασίας (Εικ. 2), χρησιμοποιείται ένα ζεύγος αντισωμάτων ειδικών σε χωρικά απομακρυσμένους επιτόπους του μελετημένου αντιγόνου.

I. Απορρόφηση αντισωμάτων στο υπόστρωμα

Στα φρεάτια μιας πλάκας 96 φρεατίων για ανοσοδοκιμασία απορροφήστε αντισώματα υποστρώματος 1-2 μg ανά φρεάτιο σε 100 μl φυσιολογικού ορού ρυθμισμένου με φωσφορικά (PBS). Η επώαση πραγματοποιείται για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου και ανακινείται σε οριζόντιο αναδευτήρα πλάκας. Η πλύση (2 φορές) των μη δεσμευμένων μορίων αντιγόνου πραγματοποιείται με φυσιολογικό ορό ρυθμισμένο με φωσφορικά που περιέχει 0,1% Tween-20 (PBST).

II. μπλοκάρισμα

Για τον αποκλεισμό μη ειδικών θέσεων δέσμευσης, τα φρεάτια γεμίζονται με PBST και επωάζονται για 10-15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου.

III. Επώαση με αντιγόνο

Στα φρεάτια του δισκίου με προαπορροφημένα αντισώματα συμβάλλουν 50 μl του δοκιμαστικού διαλύματος ή τυπικές αραιώσεις του αντιγόνου. Οι αραιώσεις αντιγόνου θα πρέπει να παρασκευάζονται από PBST καθώς το Tween-20 μειώνει τη μη ειδική σύνδεση των μορίων πρωτεΐνης μεταξύ τους και στην επιφάνεια της πλάκας. Τόσο το δοκιμαστικό διάλυμα όσο και οι τυπικές αραιώσεις του αντιγόνου προστίθενται σε ζεύγη (ή 3 αντίγραφα), χρησιμοποιώντας δύο (τρία) φρεάτια για κάθε αραίωση πρωτεΐνης. Η επώαση πραγματοποιείται σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά με συνεχή ανάδευση. Η πλύση πραγματοποιείται με διάλυμα PBST 3 φορές.

IV. Επώαση με σημασμένα με ένζυμα αντισώματα

100 μl διαλύματος ειδικών αντισωμάτων συζευγμένων με ετικέτα ενζύμου προστίθενται στα φρεάτια του δισκίου. Η βέλτιστη συγκέντρωση συζευγμένων αντισωμάτων καθορίζεται συνήθως από τον κατασκευαστή (συνήθως χρησιμοποιείται συγκέντρωση 2-4 μg/ml). Η επώαση με αντισώματα που περιέχουν μια ετικέτα ενζύμου πραγματοποιείται για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου και ανακινείται σε οριζόντιο αναδευτήρα πλάκας. Το πλύσιμο πραγματοποιείται με PBST 5-6 φορές.

V. Διεξαγωγή ενζυματικής αντίδρασης, συνοδευόμενης από την εμφάνιση έγχρωμου προϊόντος

100 μl του διαλύματος του υποστρώματος προστίθενται στα φρεάτια και επωάζονται για 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου με συνεχή ανάδευση.

VI. Διακοπή της ενζυμικής αντίδρασης

Πριν από τη μέτρηση της οπτικής πυκνότητας, η χρωματική αντίδραση διακόπτεται με 0,5 M H2SO4. Μετά την επώαση, 50 μl διαλύματος θειικού οξέος 0,5 M προστίθενται στα φρεάτια με το διάλυμα εργασίας OFD. Μετά από αυτό, μπορείτε να ξεκινήσετε αμέσως τη μέτρηση της οπτικής πυκνότητας.

VII. Μέτρηση οπτικής πυκνότητας

Η οπτική πυκνότητα του έγχρωμου διαλύματος προϊόντος μετράται στα λ=490 nm χρησιμοποιώντας φασματοφωτόμετρο πλακών.

έντυπη έκδοση

Ανοσοφερόμενη ανάλυση (ELISA)

Ανοσοφερόμενη ανάλυση ή μέθοδος (ELISA) - ανίχνευση αντιγόνων χρησιμοποιώντας τα αντίστοιχα αντισώματα τους συζευγμένα με ένα ένζυμο σήμανσης (υπεροξειδάση χρένου, βήτα-γαλακτοσιδάση και ή αλκαλική φωσφατάση). Αφού το αντιγόνο έχει συνδυαστεί με τους σημασμένους με ένζυμα ανοσοορούς, το υπόστρωμα/χρωμογόνο προστίθεται στο μείγμα. Το υπόστρωμα διασπάται από το ένζυμο και το χρώμα του προϊόντος της αντίδρασης αλλάζει - η ένταση του χρώματος είναι ευθέως ανάλογη με τον αριθμό των δεσμευμένων μορίων αντιγόνου και αντισωμάτων.

Τα συστατικά ανιχνεύονται με την προσθήκη επισημασμένων αντισωμάτων ή αντιγόνων. Με θετικό αποτέλεσμα αλλάζει το χρώμα του χρωμογόνου.

Έμμεση ενζυμική ανοσοδοκιμασία στερεάς φάσης

Κάθε φορά μετά την προσθήκη του επόμενου συστατικού, τα μη δεσμευμένα αντιδραστήρια αφαιρούνται από τα φρεάτια με πλύση.
I. Κατά τον προσδιορισμό των αντισωμάτων, ο ορός αίματος του ασθενούς, ο ορός αντισφαιρίνης που έχει επισημανθεί με το ένζυμο και το υπόστρωμα/χρωμογόνο για το ένζυμο προστίθενται διαδοχικά στα φρεάτια των πλακών με το προσροφημένο αντιγόνο.

II. Κατά τον προσδιορισμό του αντιγόνου, το αντιγόνο (για παράδειγμα, ορός αίματος με το επιθυμητό αντιγόνο) εισάγεται στα φρεάτια με απορροφημένα αντισώματα, προστίθενται ο διαγνωστικός ορός εναντίον του και τα δευτερεύοντα αντισώματα (κατά του διαγνωστικού ορού) που επισημαίνονται με το ένζυμο, και στη συνέχεια το υπόστρωμα / χρωμογόνο για το ένζυμο.

Ανταγωνιστική ELISA για την ανίχνευση αντισωμάτων:τα αντισώματα ενδιαφέροντος και τα σημασμένα με ένζυμα αντισώματα ανταγωνίζονται μεταξύ τους για τα αντιγόνα που προσροφούνται στη στερεά φάση.

Προσδιορισμός της επισήμανσης υπεροξειδάσης χρησιμοποιώντας ενισχυμένη χημειοφωταύγεια. Ανάπτυξη γρήγορων μεθόδων για ενζυμική ανοσοδοκιμασία, που πραγματοποιείται με χρήση φορητών συσκευών. Συνέργεια και βαθμός ενίσχυσης. Ένταση και διάρκεια εκπομπής φωτός.

Ενζυμική ανοσοδοκιμασία με ενισχυμένη χημειοφωταύγεια

ΕΙΣΑΓΩΓΗ

Η επισήμανση του ενζύμου μπορεί να προσδιοριστεί ποσοτικά με διάφορες μεθόδους, για παράδειγμα, χρησιμοποιώντας χρωματομετρία, φθοριομετρία, ραδιομετρία και ποτενσιομετρία.

Πρόσφατα, η χημειοφωταύγεια ή βιοφωταύγεια έχει επίσης χρησιμοποιηθεί για το σκοπό αυτό. Οι ετικέτες ενζύμων που μπορούν να προσδιοριστούν χρησιμοποιώντας αντιδράσεις που συνοδεύονται από εκπομπή φωτός παρουσιάζονται στον πίνακα. 1. Γενικά, η ευαισθησία των μεθόδων ανίχνευσης χημικής και βιοφωταύγειας είναι πολύ υψηλή και εάν χρησιμοποιείται επίσης ενίσχυση σήματος από ετικέτα ενζύμου, τότε η ευαισθησία των αντίστοιχων μεθόδων ανοσοδοκιμασίας θα πρέπει να είναι εξαιρετικά υψηλή.

Οι δυνατότητες της μεθόδου βιοφωταύγειας έχουν πρόσφατα αποδειχθεί χρησιμοποιώντας το παράδειγμα του προσδιορισμού της D-γαλακτοσιδάσης. Χρησιμοποιώντας τη συζευγμένη αντίδραση γαλακτόζης-αφυδρογονάσης AOH:PMN2 οξειδορεδουκτάσης-βακτηριακής λουσιφεράσης, ανιχνεύθηκαν 2 * 10″22 mol/3-γαλακτοσιδάση.

Η υπεροξειδάση του χρένου χρησιμοποιείται ευρέως ως ετικέτα σε ενζυμική ανοσοδοκιμασία, οι μέθοδοι λήψης και σταθεροποίησης συζεύξεων με τις οποίες έχουν μελετηθεί καλά.

Η υπεροξειδάση του χρένου προσδιορίζεται συχνότερα χρωματομετρικά, αλλά διάφορες αντιδράσεις χημικής και βιοφωταύγειας μπορούν επίσης να χρησιμοποιηθούν για το σκοπό αυτό.

Ο προσδιορισμός της υπεροξειδάσης χρησιμοποιώντας μια αντίδραση χημειοφωταύγειας στο σύστημα λουμινόλης-υπεροξειδίου του υδρογόνου ενισχυμένη με φαινολικές ενώσεις έχει μελετηθεί λεπτομερώς.

Αυτή η προσέγγιση για τον προσδιορισμό της ενζυμικής δραστικότητας έχει πολλά πλεονεκτήματα σε σύγκριση με άλλες μεθόδους προσδιορισμού. Τα κύρια χαρακτηριστικά του παρατίθενται στον Πίνακα. 2.

Ενισχυτές. Διάφορες ενώσεις, συμπεριλαμβανομένων των 6-υδροξυβενζοθειαζολών, όπως η λουσιφερίνη, οι φαινόλες, οι ναφθόλες και οι αμίνες, έχουν την ικανότητα να ενισχύουν την εκπομπή φωτός στην καταλυόμενη από υπεροξειδάση οξείδωση του αυλού με υπεροξείδιο του υδρογόνου.

Στο σχ. 1 δείχνει τις δομές των εκπροσώπων των ουσιών κάθε κατηγορίας. Ο βαθμός ενίσχυσης της εκπομπής φωτός εξαρτάται από τη συγκέντρωση των αντιδραστηρίων. Μια τυπική εξάρτηση της έντασης της φωταύγειας από τη συγκέντρωση του ενισχυτή στην αντίδραση της λουμινόλης με το υπεροξείδιο του υδρογόνου, που καταλύεται από την υπεροξειδάση και ενισχύεται από την 6-υδροξυβενζοθειαζόλη, φαίνεται στο Σχήμα 3.

Συνέργεια και βαθμός ενίσχυσης. Στο σύστημα υπεροξειδάση - αυλός - υπεροξείδιο του υδρογόνου, η επίδραση του μπλε-

rgism, όπως αποδεικνύεται από τα στοιχεία που δίνονται στον πίνακα. 3. Ο βαθμός ενίσχυσης επηρεάζεται από πολλούς παράγοντες. Ωστόσο, έχει επιτευχθεί αύξηση της εκπομπής φωτός πάνω από 500 φορές.

Παρουσία ορισμένων ενισχυτών, η εκπομπή φωτός φόντου στο σύστημα λουμινόλης-υπεροξειδίου του υδρογόνου μειώνεται. Κατά τον προσδιορισμό της δραστηριότητας της υπεροξειδάσης, αυτό καθιστά δυνατή την αύξηση της αναλογίας σήματος προς θόρυβο κατά πολλές τάξεις μεγέθους μόνο μέσω της χρήσης τέτοιων ενισχυτών.

Η ενίσχυση της φωταύγειας είναι χαρακτηριστική των διαφόρων κυκλικών διακυλυδραζιδίων, υπό τη δράση οξειδωτικών παραγόντων παρουσία υπεροξιντάσης. Ενίσχυση δεν παρατηρείται στην περίπτωση ορισμένων ουσιών με δράση υπεροξειδάσης, όπως η αιμοσφαιρίνη, η οποία καταλύει μόνο χρωματομετρικές αντιδράσεις.

Αυτό το γεγονός υποδηλώνει υψηλότερη εξειδίκευση της βελτιωμένης δοκιμασίας χημικοφωταύγειας σε σύγκριση με τις χρωματομετρικές μεθόδους. Τα φάσματα του εκπεμπόμενου φωτός είναι πρακτικά τα ίδια σε ενισχυμένες και μη ενισχυμένες αντιδράσεις. Αυτό «υποδηλώνει ότι ο ίδιος ο ενισχυτής δεν εκπέμπει φως.

Απουσία ενισχυτών, η χημειοφωταύγεια στο σύστημα υπεροξειδάσης-λουμινόλης-υπεροξειδίου φαίνεται να περιορίζεται από τη σχετικά αργή αντίδραση της υπεροξειδάσης, η οποία έχει τη μορφή της λεγόμενης ένωσης II, με τη λουμινόλη, η οποία έχει ως αποτέλεσμα το σχηματισμό λουμινόλης ρίζες και την αναγέννηση της υπεροξειδάσης.

Ενισχυτές ικανοί να αντιδρούν γρήγορα με μια τέτοια ένωση μπορούν να αυξήσουν την εκπομπή φωτός επιταχύνοντας τη μετατροπή της ένωσης II σε δραστική υπεροξειδάση.

Τα προϊόντα μετατροπής ενισχυτή μπορούν στη συνέχεια να αντιδράσουν γρήγορα με τη λουμινόλη για να σχηματίσουν πρόσθετες ρίζες λουμινόλης και έτσι να ενισχύσουν περαιτέρω την εκπομπή φωτός. Οι ενισχυτές μπορούν επίσης να δράσουν σε ανενεργά ενδιάμεσα υπεροξειδάσης, όπως η Ένωση III.

Αντιδραστήρια

Ένας σημαντικός παράγοντας στον προσδιορισμό της δραστικότητας της υπεροξειδάσης χρησιμοποιώντας ενισχυμένη χημειοφωταύγεια είναι η χημική καθαρότητα των κυκλικών διακυλυδραζιδίων.

Η μελέτη διαφόρων δειγμάτων λουμινόλης έδειξε ότι οι ακαθαρσίες επηρεάζουν δυσμενώς την εκπομπή φωτός. Ως αποτέλεσμα φωτοχημικών και θερμικών διεργασιών, η λουμινόλη αποσυντίθεται μερικώς και οι προκύπτουσες ακαθαρσίες επηρεάζουν την κινητική και την ένταση της εκπομπής φωτός.

Στον πίνακα. Το Σχήμα 4 παρουσιάζει τα αποτελέσματα μιας σύγκρισης της καθαρότητας και των ιδιοτήτων ορισμένων εμπορικά διαθέσιμων παρασκευασμάτων λουμινόλης, καθώς και του άλατος νατρίου της λουμινόλης, που καθαρίστηκε με ανακρυστάλλωση από ένα διάλυμα υδροξειδίου του νατρίου.

2. ΕΝΙΣΧΥΜΕΝΗ ΑΝΟΣΟΔΟΤΗΣΗ ΧΗΜΙΦΩΤΕΙΟΥ

Ενισχυμένη ανοσοδοκιμασία χημειοφωταύγειας με υπεροξειδάση ως σήμα ενζύμου έχει χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση πολλών ενώσεων. Ορισμένα παραδείγματα δίνονται στον πίνακα. 5. Σε αυτές τις ανοσοδοκιμασίες χρησιμοποιήθηκαν ανταγωνιστικές και ανοσολογικές μέθοδοι εκχύλισης, καθώς και οι πιο συχνά χρησιμοποιούμενοι στερεοί φορείς.

Αναλογία σήματος/υποβάθρου στον προσδιορισμό της χημιφωταύγειας της υπεροξειδάσης χρένου με ενίσχυση με l-ιωδοφαινόλη. 6 TLC - χρωματογραφία λεπτής στιβάδας.

ρύζι. 3 δείχνει το σχήμα για τον προσδιορισμό της ωοθυλακιοτρόπου ορμόνης. Σε αυτή τη μέθοδο, το όριο ανίχνευσης της FSH σε μια πλάκα μικροτιτλοδότησης είναι περίπου 0,01 pmu. Η μέθοδος χαρακτηρίζεται από εξαιρετική αναπαραγωγιμότητα τόσο εντός της ίδιας εκτέλεσης όσο και μεταξύ των εκτελέσεων.

Η μέθοδος της ενισχυμένης χημειοφωταύγειας έχει επίσης χρησιμοποιηθεί με επιτυχία για την ανίχνευση της ετικέτας υπεροξειδάσης στη μελέτη υβριδισμού DNA.

ΜΕΘΟΔΟΣ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΟΣ ΦΘΟΡΙΣΜΟΥ (MFA).

μέθοδος ποσοτικού προσδιορισμού με χρήση φωτόμετρου πλακών και ποιοτικής ανάλυσης με χρήση φωτογραφικής ανίχνευσης με ευαισθησία πολλών πικογραμμάτων.

συσκευές

Υπάρχουν επί του παρόντος διάφοροι τύποι μετρητών φωταύγειας που διατίθενται στη βιομηχανία που είναι κατάλληλοι για τη μέτρηση του φωτός που εκπέμπεται σε αντιδράσεις ενισχυμένης χημειοφωταύγειας.

Μερικά από αυτά τα φωτόμετρα έχουν τροποποιηθεί ειδικά για ανάλυση βελτιωμένης χημικής φωταύγειας. Η ένταση και η διάρκεια της εκπομπής φωτός σε αντιδράσεις ενίσχυσης της φωταύγειας έχει διευκολύνει την ανάπτυξη απλών μετρητών φωταύγειας που χρησιμοποιούν φωτοδίοδοι πυριτίου ή φωτογραφικό φιλμ υψηλής ταχύτητας ως ανιχνευτές.

Τέτοια φωτόμετρα είναι σχετικά φθηνά, φορητά και επομένως μπορούν να χρησιμοποιηθούν εκτός εργαστηρίων. Επί του παρόντος, η MAST Immunosystems παράγει ειδικές κάμερες για την ανίχνευση χημειοφωταύγειας της ειδικής για το αλλεργιογόνο ανοσοσφαιρίνης Ε στη μέθοδο ELISA. Μπορεί να υποτεθεί ότι στο μέλλον θα δημιουργηθούν κιτ με φωτογραφική καταγραφή των αποτελεσμάτων της ELISA και άλλων ενώσεων, ο προσδιορισμός των οποίων πρέπει να πραγματοποιηθεί σε κλινικές, νοσοκομεία ή στο σπίτι.

Κατασκευασμένες συσκευές και σετ αντιδραστηρίων.

Ενισχυμένα κιτ ανοσοδοκιμών ενζύμου χημειοφωταύγειας και σχετικά όργανα είναι τώρα διαθέσιμα με την ονομασία Amerlite από την Amersham International pic.

Η δοκιμασία εκτελείται σε λωρίδες πλακών μικροτιτλοδότησης άσπρο χρώμα, και η μέτρηση της φωταύγειας εκτελείται γρήγορα και αυτόματα από ένα ειδικό φωτόμετρο μικροπλάκας.

Επί του παρόντος, παράγονται κιτ για τον προσδιορισμό της ορμόνης διέγερσης του θυρεοειδούς, της ανθρώπινης χοριογοναδοτροπίνης, του καρκινοεμβρυονικού αντιγόνου, της άλφα-φετοπρωτεΐνης, της θυροξίνης, της τριιωδοθυρονίνης και για τον προσδιορισμό του δείκτη ελεύθερης θυροξίνης. Αυτές οι δοκιμασίες έχουν υψηλή ευαισθησία και εξαιρετική αναπαραγωγιμότητα.

ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ

Ο προσδιορισμός της ετικέτας υπεροξειδάσης με χρήση ενισχυμένης χημειοφωταύγειας χαρακτηρίζεται από υψηλή ευαισθησία, ειδικότητα και απλότητα και μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως βάση για την ανάπτυξη βολικών και γρήγορες μεθόδουςενζυμική ανοσοδοκιμασία, που πραγματοποιείται με τη χρήση φθηνών φορητών οργάνων.

Αρχές ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας, κύριοι τύποι ELISA, εφαρμογή στη διάγνωση

Μέθοδοι ανοσοδοκιμασίας στην ιατρική πρακτική, η αλληλεπίδραση ενός αντιγόνου και ενός αντισώματος στη βάση του.

Τύποι ανοσοπροσδιορισμού ανάλογα με τον τύπο της ετικέτας και τις συνθήκες δοκιμής. Χαρακτηριστικά των συστατικών που χρησιμοποιούνται στην ενζυμική ανοσοδοκιμασία.

περίληψη, προστέθηκε 11/07/2011

Ορολογικές αντιδράσεις

Ορολογικές αντιδράσεις ως αντιδράσεις μεταξύ αντιγόνων και αντισωμάτων in vitro.

Ταξινόμηση ορολογικών αντιδράσεων ανάλογα με τη φύση και τη φυσική κατάσταση του αντιγόνου. Αντίδραση καθίζησης γέλης σύμφωνα με το Ouchterlony. Μέθοδος ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας.

παρουσίαση, προστέθηκε 06/03/2015

Φασματική ανάλυση του ηλεκτροκαρδιογραφήματος

Μέσα καταγραφής και ανάλυσης ηλεκτροκαρδιογραφημάτων. Σύγκριση αναλογικής και ψηφιακής επεξεργασίας σήματος.

Διερεύνηση ηλεκτροκαρδιοσημάτων που λαμβάνονται με χρήση ηλεκτροκαρδιογράφου υπερ-ανάλυσης. Δυνατότητες ανάλυσης με χρήση του πακέτου MatLab.

περίληψη, προστέθηκε 12/09/2011

Η χρήση της ακτινοβολίας στην ιατρική

Θεραπευτική αγωγή βρογχικό άσθμαυπέρυθρη ακτινοβολία. Τεχνητές πηγές υπεριώδους (UV) ακτινοβολίας στην ιατρική. Βακτηριοκτόνοι λαμπτήρες χωρίς όζον και όζον.

Απολύμανση πόσιμου νερού με υπεριώδη ακτινοβολία. Διαγνωστικά με ακτίνες Χ, συσκευή συσκευής.

περίληψη, προστέθηκε 27/08/2009

Ακρομεγαλία

Η ακρομεγαλία είναι μια ασθένεια που σχετίζεται με αυξημένη παραγωγή αυξητικής ορμόνης (σωματοτροπική ορμόνη). Κλινική εικόνα της νόσου. Χαρακτηριστικός εργαστηριακός δείκτης ακρομεγαλίας στη διάγνωση. Δοκιμή με θυρολιβερίνη. Θεραπεία με ακτίνες Χ.

παρουσίαση, προστέθηκε 05/03/2012

Ογκικοί δείκτες στην κλινική πράξη

Η χρήση εργαστηριακών αναλύσεων για τη διάγνωση ογκολογικών παθήσεων και η μετεγχειρητική παρακολούθηση της αποτελεσματικότητας της χειρουργικής και της χημειοθεραπείας.

Προσδιορισμός καρκινικών δεικτών με μεθόδους ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας, ανοσοφωταύγειας και ραδιοανοσοδοκιμασίας.

περίληψη, προστέθηκε 10/09/2010

Φυσικοχημικές μέθοδοι ανάλυσης φαρμάκων

Ταξινόμηση φυσικών και χημικών μεθόδων ανάλυσης. Φασματική ανάλυση μοριακής απορρόφησης. Νόμοι απορρόφησης ακτινοβολίας. οπτική χρωματομετρία. Προσδιορισμός συγκέντρωσης στη φωτοηλεκτροχρωματομετρία. Φασματοφωτομετρία φαρμάκων.

περίληψη, προστέθηκε 14/11/2010

Κύριες Εφαρμογές της Ενεργοποιημένης Χημειοφωταύγειας

Ο μηχανισμός των αντιδράσεων συνοδεύεται από τη λάμψη ζωντανών οργανισμών, ορατή με γυμνό μάτι.

Η χρήση της ενεργοποιημένης χημειοφωταύγειας και βιοφωταύγειας ως εργαλείο σε ιατρικές και βιολογικές μελέτες ορού αίματος, ούρων, εγκεφαλονωτιαίου υγρού και σάλιου.

θητεία, προστέθηκε 25/10/2011

Σύγχρονες μέθοδοι διάγνωσης μολυσματικών ασθενειών

Μέθοδοι για τη διάγνωση μολυσματικών ασθενειών στα ζώα.

Πολυμεράση αλυσιδωτή αντίδραση. Ενζυμική ανοσοδοκιμασία, οι στόχοι της. Διάγνωση λοιμώξεων που προκαλούνται από λοιμώξεις από σταφυλόκοκκο, πνευμονιόκοκκο και σαλμονέλα. Ο αιτιολογικός παράγοντας της βρουκέλλωσης, η διάγνωσή της.

περίληψη, προστέθηκε 26/12/2013

Φωτεινές ετικέτες

Η έννοια της φωταύγειας, η φυσική της φύση και τα αίτια εμφάνισής της.

Ο κανόνας του Στόουκς. Τύποι φωταύγειας (φωτοφωταύγεια, χημειοφωταύγεια) και η έξοδος της. Βασικοί νόμοι της θερμικής ακτινοβολίας. Φωτεινές, ποιοτικές και ποσοτικές αναλύσεις ουσιών.

παρουσίαση, προστέθηκε 05/05/2016

Στεφανιαία νόσο

1.1 Ταξινόμηση της στεφανιαίας νόσου

Η IHD περιλαμβάνει αρκετές ασθένειες που διαφέρουν σημαντικά στις κλινικές εκδηλώσεις.

Κλινική χρόνιας πολφίτιδας: ινώδης, υπερτροφική, γαγγραινώδης

Ταξινόμηση

Οξεία πολφίτιδα πολφική υπεραιμία ορώδης περιορισμένη ορώδης διάχυτη πυώδης τραυματική Χρόνια πολφίτιδα ινώδης γάγγραινα υπερτροφική (πολλαπλασιαστική) Έξαρση χρόνιας πολφίτιδας Χρόνια ...

μαστίτιδα γαλουχίας

4.

Ταξινόμηση

Χειρουργική ταξινόμηση μαστίτιδας: I. Λόγω της νόσου: 1. Μη ειδική. 2. Συγκεκριμένα. II. Σύμφωνα με τη λειτουργική κατάσταση του μαστού: 1. Γαλουχία.

Ενζυμική ανοσοδοκιμασία (ELISA)

2. Μη γαλουχία. III. Κατά την πορεία της φλεγμονώδους διαδικασίας: 1. Οξεία. 2. Χρόνια. IV...

Φαρμακευτικά φυτά και φαρμακευτικά φυτικά υλικά που χρησιμοποιούνται στην ιατρική για την ουρολιθίαση

1.1 Ταξινόμηση

Η ουρολιθίαση μπορεί να ταξινομηθεί ανάλογα με τον εντοπισμό των λίθων: πέτρες στα νεφρά και στους ουρητήρες (νεφροουρητηρολιθίαση), πέτρες Κύστη. Ίσως η διαίρεση της ουρολιθίασης σύμφωνα με τη σύνθεση των λίθων ...

Καρκίνος του λάρυγγα

3.

Ταξινόμηση

Σύμφωνα με την εγχώρια ταξινόμηση του καρκίνου του λάρυγγα (Συλλογή Οδηγιών του Υπουργείου Υγείας, υπάρχουν 4 στάδια: Στάδιο Ι: ο όγκος καταλαμβάνει μόνο μέρος ενός τμήματος του λάρυγγα δεν διεισδύει βαθύτερα από το υποβλεννογόνιο στρώμα ...

καρκίνο της ουροδόχου κύστης

2. Ταξινόμηση

Τα νεοπλάσματα της ουροδόχου κύστης αντιπροσωπεύονται κυρίως από μεταβατικό κυτταρικό καρκίνωμα.

Ωστόσο, για να αποτρέψουμε τα διαγνωστικά λάθη, δεν πρέπει να ξεχνάμε ότι ...

Καρκίνωμα οισοφάγου

Ταξινόμηση

Διεθνής Ιστολογική Ταξινόμηση Όγκων Οισοφάγου (1990): Επιθηλιακοί όγκοι. καλοήθεις όγκους. Πλακώδες θηλώμα. Ιογενές κονδυλώματα. Αδένωμα. Κακοήθεις όγκοι.

Ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα…

Πληγές, ταξινόμηση τραυμάτων, μηχανικά αντισηπτικά στην θεραπεία τραυμάτων

Ταξινόμηση πληγών

Υπάρχουν διάφορες ταξινομήσεις τραυμάτων. Σύμφωνα με τη φύση της βλάβης των ιστών, τα τραύματα διακρίνονται: μαχαίρι, κομμένο, τεμαχισμένο, μελανιασμένο, σκισμένο, δαγκωμένο, δηλητηριασμένο, πυροβολισμό. Τα τραύματα από μαχαίρι προκαλούνται με διατρητικό όπλο (ξιφολόγχη, βελόνα κ.λπ.) ...

Φυτικές πηγές τανίνης και χρήση τους στην ιατρική

2.

Ταξινόμηση

Όλες οι τανίνες χωρίζονται σε τανίνεςομάδες: υδρολυόμενες και συμπυκνωμένες. Οι υδρολυόμενες τανίνες, υπό τη δράση αραιωμένων ανόργανων οξέων, βάσεων και ενζύμων τανινακυλο υδρολάσης, διασπώνται σε υδατάνθρακες και φαινολοκαρβοξυλικά οξέα...

Αποκατάσταση παιδιών με εγκεφαλική παράλυση

1.2 Ταξινόμηση της εγκεφαλικής παράλυσης.

Επί του παρόντος, η Ρωσική Ομοσπονδία χρησιμοποιεί την ταξινόμηση Κ.Α.

Semenova (1974). - σπαστική διπληγία - υπάρχει κυρίαρχη βλάβη στα πόδια - διπλή ημιπληγία - σπαστική τετραπάρεση, τα χέρια επηρεάζονται κάπως περισσότερο ...

Ρευματοειδής αρθρίτιδα

1. Ταξινόμηση

Για δεκαετίες, η ρευματοειδής αρθρίτιδα βρίσκεται στο επίκεντρο της ρευματολογικής επιστήμης, γεγονός που αντανακλά τη μεγάλη σημασία της νόσου σε γενικούς ιατρικούς και κοινωνικούς όρους...

Ο ρόλος των μη φαρμακευτικών μεθόδων θεραπείας του βρογχικού άσθματος

1.1.1 Ταξινόμηση

Το βρογχικό άσθμα (ΒΑ) χωρίζεται σε φάση έξαρσης (το ύψος της νόσου) και ύφεση (όταν πρακτικά δεν υπάρχουν σημεία της νόσου).

Σε μια κρίση άσθματος διακρίνεται μια περίοδος προδρόμου (φτάρνισμα, καταρροή κ.λπ.).

Ο ρόλος του παραϊατρού στη διάγνωση, θεραπεία και πρόληψη του τετάνου. Αντιεπιδημικά μέτρα στο επίκεντρο των λοιμωδών νοσημάτων. Δυναμική και συγκριτική ανάλυση των ασθενειών του τετάνου στην περιοχή Salsky για την περίοδο 2013-2014.

1.4 Ταξινόμηση

Τα χαρακτηριστικά ταξινόμησης λαμβάνουν υπόψη διάφορους παράγοντες - τον μηχανισμό μόλυνσης, τον επιπολασμό και τη σοβαρότητα του σπασμωδικού συνδρόμου και τα χαρακτηριστικά της κλινικής πορείας.

Λαμβάνοντας υπόψη αυτούς τους παράγοντες, διακρίνονται οι ακόλουθες μορφές τετάνου: 1 ...

Ο ρόλος του παραϊατρού στην οργάνωση και διεξαγωγή διαγνωστικών, θεραπευτικών και προληπτικά μέτραγια την καταπολέμηση της υπέρτασης

1.2 Ταξινόμηση

Κατά τη διάρκεια ολόκληρης της περιόδου μελέτης της νόσου, έχουν αναπτυχθεί περισσότερες από μία ταξινομήσεις υπέρτασης: σύμφωνα με εμφάνισηο ασθενής, οι λόγοι για την αύξηση της πίεσης, η αιτιολογία, το επίπεδο πίεσης και η σταθερότητά της, ο βαθμός βλάβης οργάνων, η φύση της πορείας ...

Διαβήτης

1.1 Ταξινόμηση

Υπάρχουν διάφοροι τύποι ταξινόμησης Διαβήτης, τα οποία βασίζονται σε κλινική εικόνα, αιτιολογία, βαθμός αντιστάθμισης του μεταβολισμού των υδατανθράκων, σοβαρότητα θεραπείας, επιπλοκές…

Ενζυμική ανοσοδοκιμασία (ELISA)- μια σύγχρονη εργαστηριακή μελέτη, κατά την οποία γίνεται αναζήτηση για συγκεκριμένα αντισώματα στο αίμα ή αντιγόνα για συγκεκριμένες ασθένειες, προκειμένου να εντοπιστεί όχι μόνο η αιτιολογία, αλλά και το στάδιο της νόσου.

Τα αποτελέσματα ELISA μπορούν να εκδοθούν ποιοτικά και ποσοτικά.

Επί του παρόντος, το ELISA χρησιμοποιείται στις ακόλουθες περιπτώσεις:

1) Αναζήτηση για συγκεκριμένα αντισώματα για οποιαδήποτε μολυσματική ασθένεια.
2) αναζήτηση αντιγόνων οποιωνδήποτε ασθενειών (μολυσματικές, αφροδίσιες ασθένειες).
3) μελέτη της ορμονικής κατάστασης του ασθενούς.
4) εξέταση για καρκινικούς δείκτες.
5) εξέταση για παρουσία αυτοάνοσων νοσημάτων.

Πλεονεκτήματα της μεθόδου ELISA:

1) Υψηλή ειδικότητα και ευαισθησία της μεθόδου ELISA (πάνω από 90%).
2) Η ικανότητα προσδιορισμού της νόσου και παρακολούθησης της δυναμικής της διαδικασίας, δηλαδή σύγκρισης της ποσότητας των αντισωμάτων σε διαφορετικά χρονικά διαστήματα.
3) Διαθεσιμότητα διαγνωστικών ELISA σε οποιοδήποτε ιατρικό ίδρυμα.

Σχετικό μειονέκτημα:

1) Προσδιορισμός της ανοσολογικής απόκρισης (αντισώματα), αλλά όχι του ίδιου του παθογόνου.

ΒΑΣΙΚΕΣ ΕΝΝΟΙΕΣ

Πριν διευκρινίσουμε την ουσία της μεθόδου ELISA, ας κατανοήσουμε εν συντομία ορισμένες έννοιες.
Αντισώματα (ή ανοσοσφαιρίνες - Ig)– ειδικές πρωτεΐνες που παράγονται από το Β –
λεμφοκύτταρα (κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος) ως απόκριση στην κατάποση οποιουδήποτε μολυσματικού παθογόνου (ιούς, βακτήρια, μύκητες κ.λπ.).

Υπάρχουν ανοσοσφαιρίνες Α (IgA), ανοσοσφαιρίνες Ε (IgE), ανοσοσφαιρίνες Μ (IgM), ανοσοσφαιρίνες G (IgG), ανοσοσφαιρίνες D (IgD). Διαφέρουν μεταξύ τους σε μοριακό σχήμα και μάζα, χρόνο ημιζωής, συμμετοχή/μη συμμετοχή σε μολυσματικές διεργασίες, χρόνο ανίχνευσης από τη στιγμή της μόλυνσης. Αν λάβουμε υπόψη το μοριακό βάρος, τότε πάνω από όλα το IgM το έχει - είναι ένα πενταμερές (950.000 daltons), σε αντίθεση με το υπόλοιπο Ig (από 150 έως 200.000 Da), λόγω του οποίου το IgM απλά δεν μπορεί να περάσει από τον φραγμό του πλακούντα.

Επομένως, η ανίχνευση IgM σε ένα παιδί ηλικίας 1 έτους είναι πάντα σημάδι μόλυνσης στο έμβρυο. Στον ορό του αίματος, το μεγαλύτερο μέρος των ανοσοσφαιρινών αντιπροσωπεύεται από IgG (75-85%) και το χαμηλότερο είναι IgE (0,003%). Μόνο τα IgA, M, G εμπλέκονται άμεσα στη μολυσματική διαδικασία. Τα IgE είναι σημάδι αλλεργικών αντιδράσεων και ασθενειών και η IgD μπορεί να βρεθεί μόνο στον ιστό των λεμφαδένων και των αμυγδαλών, παίζει ρόλο στο σχηματισμό τοπικής ανοσίας.

Κατηγορίες ανοσοσφαιρίνης

Αντιγόνα- μακρομοριακές ουσίες οργανικής προέλευσης, ιδίως παθογόνα μολυσματικών και άλλων ασθενειών, καθώς και ουσίες διαφόρων αλλοιωμένων κυττάρων που σχηματίζονται σε μια συγκεκριμένη ασθένεια (αυτοάνοσα νοσήματα, ογκολογία).

ανοσοποιητικό σύμπλεγμα- ένα σύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος που εμπλέκεται στη διαδικασία του ανοσοποιητικού.

Ποια είναι η βάση της μεθόδου ELISA.

Υπάρχουν διάφοροι τύποι ELISA (άμεση, έμμεση, μέθοδος αποκλεισμού, ανταγωνιστική), ωστόσο, στην πράξη, η ετερογενής ανοσοδοκιμασία στερεάς φάσης ή η ELISA (ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία) χρησιμοποιείται συχνότερα

Η βάση της συνδεδεμένης με ένζυμο ανοσοπροσροφητικής δοκιμασίας είναι η ανοσοαντίδραση ενός αντιγόνου και ενός αντισώματος με το σχηματισμό ενός ανοσοσυμπλέγματος: αντιγόνο-αντίσωμα, που έχει ως αποτέλεσμα αλλαγή στην ενζυματική δραστηριότητα συγκεκριμένων ετικετών στην επιφάνεια των αντισωμάτων.

Η ουσία της μεθόδου ELISA

Με απλά λόγια, αυτή η διαδικασία μπορεί να χωριστεί σε διάφορα στάδια:

1) Στην επιφάνεια των πηγαδιών του δισκίου του γιατρού που διεξάγει την εξέταση, υπάρχει ένα καθαρισμένο αντιγόνο ενός συγκεκριμένου παθογόνου.

Όταν προστίθεται το βιολογικό υλικό ενός ασθενούς (ορός αίματος), εμφανίζεται μια ειδική αντίδραση μεταξύ αυτού του αντιγόνου και του επιθυμητού αντισώματος (ανοσοσφαιρίνη). Αυτή η ένωση θα λειτουργήσει ως «ειδικό αντιγόνο» στο επόμενο βήμα.

2) Σε αυτό το στάδιο, λαμβάνει χώρα ο σχηματισμός IR (ανοσολογικά συμπλέγματα) - η αντίδραση μεταξύ του «ειδικού αντιγόνου» και του συζυγούς (πρόκειται για μια ανοσοσφαιρίνη σημασμένη με το ένζυμο υπεροξειδάση). Προστίθεται ειδικό χρωμογόνο. Το αποτέλεσμα μιας τέτοιας ενζυματικής αντίδρασης είναι ο σχηματισμός μιας έγχρωμης ουσίας στο φρεάτιο του δισκίου, η ένταση του χρώματος της οποίας εξαρτάται από την ποσότητα των ανοσοσφαιρινών (αντισωμάτων) που περιέχονται στο υλικό του ασθενούς.

3) Στη συνέχεια, αξιολογείται το αποτέλεσμα: φωτομετρία με χρήση πολυκαναλικού φασματοφωτόμετρου, σύγκριση της οπτικής πυκνότητας του υλικού δοκιμής με την οπτική πυκνότητα δειγμάτων ελέγχου, μαθηματική επεξεργασία των αποτελεσμάτων.

Η ποσότητα των αντισωμάτων σε έναν ασθενή εξαρτάται άμεσα από το ύψος της οπτικής πυκνότητας ενός δεδομένου φρεατίου.

Συνήθως, στην πράξη χρησιμοποιούνται πλάκες 96 φρεατίων.

Κατά τη μέτρηση της οπτικής πυκνότητας (OD) του υγρού δοκιμής, υπολογίζεται ο αριθμός (ή η συγκέντρωση) των αντισωμάτων σε μια συγκεκριμένη μονάδα όγκου.

Στη συνέχεια το αποτέλεσμα συγκρίνεται με ένα δείγμα ελέγχου.

Πρέπει να θυμάστε:για κάθε σύστημα δοκιμών, αναπτύσσονται μεμονωμένοι δείκτες για να ληφθούν υπόψη τα αποτελέσματα, οι δείκτες του κανόνα και η παθολογία (δηλαδή, "τιμές αναφοράς"). Αυτό θα πρέπει να λαμβάνεται υπόψη κατά την αξιολόγηση των αποτελεσμάτων κάθε συγκεκριμένης μελέτης. Δεν είναι σωστό να ερμηνεύονται τα αποτελέσματα ενός εργαστηρίου από τις «τιμές αναφοράς» ενός άλλου εργαστηρίου.

Είναι επίσης λάθος να συγκρίνουμε τα αποτελέσματα διαφορετικών εργαστηρίων μεταξύ τους.

Κατά τη ρύθμιση των αντιδράσεων ELISA, μια έννοια όπως η απληστία αντισωμάτων είναι επίσης σημαντική.
Απληστία αντισωμάτων- αυτή είναι η ισχύς του δεσμού αντισώματος-αντιγόνου και η ποσότητα του αντιγόνου που σχετίζεται με τις ανοσοσφαιρίνες (αντισώματα).

Το Avidity έχει μεγάλη σημασία για την εκτίμηση της αναμενόμενης διάρκειας της λοίμωξης, η οποία είναι εξαιρετικά σημαντική στη διάγνωση της πρωτοπαθούς λοίμωξης σε εγκύους.

Η βάση του τεστ απληστίας αντισωμάτων συνίσταται στην επεξεργασία του ανοσοσυμπλέγματος (αντιγόνο-αντίσωμα) με διάλυμα ουρίας για την καταστροφή της πρωτεΐνης.

Οι δεσμοί υψηλής μανίας παραμένουν άθικτοι, ενώ οι δεσμοί χαμηλού μανιώδεις καταστρέφονται. Το αποτέλεσμα δίνεται ως δείκτης avidity, εκφρασμένος ως ποσοστό (%).

Ποιες ασθένειες ανιχνεύονται με τη διαγνωστική ELISA;

Δείκτες αυτοάνοσων νοσημάτων και δείκτες ανθρώπινης ανοσίας (ολική IgE, συνολική IgG, ολική IgA, ολική IgM, ολική IgD, εκκριτική IgA, IgG 2, IgG4, ανοσοσυμπλέγματα που κυκλοφορούν στο CEC, IgA και IgG προς γλιαδίνη και άλλα)

3. Ογκολογικοί δείκτες (TNF - παράγοντας νέκρωσης όγκου, CEA - καρκινικό-εμβρυϊκό αντιγόνο, PSA - ειδικό για τον προστάτη αντιγόνο, hCG - ανθρώπινη χοριακή γοναδοτροπίνη, CA 125, αλβεομυκίνη και πολλά άλλα)

Αναπαραγωγικές διαταραχές (οιστραδιόλη, προγεστερόνη, προλακτίνη, τεστοστερόνη, AFP-αλφαφετοπρωτεΐνη, FSH - ωοθυλακιοτρόπος ορμόνη και άλλες)

5. Παθήσεις του θυρεοειδούς αδένα (ελεύθερη και δεσμευμένη Τ3, Τ4, θυρεοσφαιρίνη, θυρεοϋπεροξειδάση - TPO, θυρεοειδοτρόπος ορμόνη - TSH).

Αυτή η λίστα δεν αντιπροσωπεύεται από όλες τις ασθένειες που διαγιγνώσκονται χρησιμοποιώντας ενζυμική ανοσοδοκιμασία.

Υλικό για ανάλυση ELISA και κανόνες για τη συλλογή του

Το πιο κοινό υλικό για την αντίδραση ELISA είναι ο ορός αίματος του ασθενούς, που λαμβάνεται με άδειο στομάχι.

Το υλικό μπορεί επίσης να χρησιμεύσει ως εγκεφαλονωτιαίο υγρό, αμνιακό υγρό, το περιεχόμενο του υαλοειδούς σώματος, βλέννα του αυχενικού σωλήνα και της ουρήθρας, επιχρίσματα.

Προετοιμασία ασθενών για παράδοση υλικού για ELISA

Το αίμα λαμβάνεται με άδειο στομάχι. Δεν χρειάζεται να πάρετε κανένα φάρμακο πριν δώσετε αίμα.

Η ανοσοενζυματική ανάλυση του υλικού πραγματοποιείται γρήγορα, εντός μιας ημέρας.

Οι καθυστερήσεις μπορεί να υπάρχουν σε διαφορετικά εργαστήρια λόγω της συσσώρευσης ορισμένης ποσότητας ορών.

Πιθανά αποτελέσματα διαγνωστικών ELISA

Κατά την αξιολόγηση των αποτελεσμάτων για συγκεκριμένες λοιμώξεις, η κατηγορία των αντισωμάτων που ανιχνεύονται και ο αριθμός τους είναι σημαντικά.

Αυτό καθορίζει όχι μόνο το ζήτημα της αιτιολογίας της λοίμωξης (είτε είναι ή όχι), αλλά και το αναμενόμενο στάδιο της νόσου (οξεία, χρόνια), καθώς και την παρουσία ενεργού λοίμωξης (οξεία ή έξαρση χρόνιας) την ώρα της εξέτασης.

Ποιος είναι κατά προσέγγιση ο χρόνος εμφάνισης των αντισωμάτων (ανοσοσφαιρίνες - Ig);

Τα πιο πρώιμα αντισώματα είναι τα IgM.

Ενζυμική ανοσοδοκιμασία (ELISA)

Μπορούν να ανιχνευθούν 1-3 εβδομάδες μετά από μια πιθανή μόλυνση, η οποία χαρακτηρίζει την οξεία φάση της μολυσματικής διαδικασίας. Η δεύτερη κατάσταση για την εμφάνιση αντισωμάτων IgM είναι η ενεργοποίηση (ή έξαρση) μιας χρόνιας διαδικασίας. Τα αντισώματα IgM κυκλοφορούν κατά μέσο όρο για περίπου 3 μήνες, μετά ο αριθμός τους σταδιακά εξαφανίζεται. Ωστόσο, σε ορισμένους ασθενείς, ίχνη IgM μπορεί να ανιχνευθούν εντός 1-2 ετών από τη μόλυνση.

Τα σύγχρονα συστήματα δοκιμών είναι εξαιρετικά ευαίσθητα, με αποτέλεσμα μη ειδικά ψευδώς θετικά αποτελέσματα (συχνά σε έγκυες γυναίκες).

Επομένως, σε αυτή την ομάδα ασθενών θα πρέπει να επανελεγχθεί η θετική IgM!

Τα αντισώματα IgA εμφανίζονται 2-4 εβδομάδες μετά τη μόλυνση, αλλά σε ποσότητα επαρκή για ανίχνευση - μετά από ένα μήνα. Η IgA ορού συντίθεται από τα πλασματοκύτταρα της σπλήνας, των λεμφαδένων και των βλεννογόνων, η εκκριτική IgA συγκεντρώνεται στους βλεννογόνους για να εκτελέσει την προστατευτική τους λειτουργία - εμπλέκονται στην τοπική ανοσία.

Από την 4η εβδομάδα μετά τη μόλυνση αρχίζουν να εμφανίζονται τα αντισώματα IgG.

Στις περισσότερες λοιμώξεις, ο τίτλος τους αυξάνεται σταδιακά με μέγιστο διαφορετικές ημερομηνίες(κατά μέσο όρο 1,5-2 μήνες), τότε ο τίτλος παραμένει σε χαμηλό επίπεδο και υποδηλώνει ανοσία. Σε ορισμένες ασθένειες (μυκοπλάσμωση, χλαμύδια, τριχομονάδες), το επίπεδο της IgG δεν είναι υψηλό, μειώνεται σημαντικά λόγω της έλλειψης ανοσίας σε αυτές τις λοιμώξεις.

Επιλογές για την ανίχνευση αντισωμάτων διαφορετικών κατηγοριών:

— Η απομονωμένη ανίχνευση αντισωμάτων IgM υποδηλώνει πρωτογενή
λοιμώξεις.
- Η ταυτόχρονη ανίχνευση IgM και IgG στο αίμα είναι χαρακτηριστική της πρωτοπαθούς λοίμωξης
τους προηγούμενους 2-3 μήνες, καθώς και κατά την έξαρση μιας χρόνιας νόσου.

Επομένως, κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης, η παρουσία IgM δεν είναι πάντα ένδειξη πρωτοπαθούς μόλυνσης.
- Η ανίχνευση της IgG μεμονωμένα μπορεί να υποδεικνύει αμφότερες την ανοσία σε αυτήν την ασθένεια,
καθώς και χρόνια μόλυνση. Στη δεύτερη περίπτωση, τόσο η ποσότητα των αντισωμάτων (τίτλος) όσο και η αλλαγή σε αυτόν τον τίτλο με την πάροδο του χρόνου έχουν σημασία. Συνήθως, οι μελέτες πραγματοποιούνται σε διαστήματα 2-4-6 εβδομάδων.
— Η ανίχνευση IgA μόνης ή με IgM υποδηλώνει πρωτοπαθή λοίμωξη. Στο
η εμφάνιση IgA μαζί με IgG αναμένεται να ενεργοποιήσει μια χρόνια λοίμωξη (κατά μέσο όρο 2 εβδομάδες από τη στιγμή της έξαρσης).

Ο προσδιορισμός της απληστίας των αντισωμάτων IgG είναι ένα εξαιρετικό συμπληρωματικό βήμα στη διάγνωση της πρωτοπαθούς λοίμωξης από μια μακροχρόνια λοίμωξη, η οποία έχει την κλινική της σημασία, κυρίως για την εκτίμηση του κινδύνου ενδομήτριας μόλυνσης του εμβρύου.

Η ανίχνευση IgG χαμηλής επιθυμίας υποδηλώνει πρωτοπαθή λοίμωξη και ανιχνεύεται κατά μέσο όρο 4-6 μήνες μετά τη μόλυνση, σπάνια περισσότερο. Τα χαμηλά IgG απαιτούν άλλη εργαστηριακή επιβεβαίωση της πρωτοπαθούς λοίμωξης (IgM).

Τα έντονα αντισώματα είναι είτε σημάδι χρόνιας νόσου και έξαρσής της, είτε ανεπτυγμένης ανοσίας.

Χαρακτηριστικά στα βρέφη:σε παιδιά έως ενός έτους και μερικές φορές 1,5 ετών, η μητρική IgG κυκλοφορεί στο αίμα σε διάφορες λοιμώξεις (δηλαδή, διείσδυσαν μέσω του πλακούντα από τη μητέρα στο έμβρυο κατά την ανάπτυξη του εμβρύου).

Δεν αποτελούν από μόνα τους σημάδι της παρουσίας μόλυνσης στο παρόν. Εάν ανιχνευτεί IgM σε αυτή την ηλικία (υπενθυμίζεται ότι η μητρική IgM δεν μπορεί να διασχίσει τον πλακούντα), τότε αυτό είναι σημάδι ενδομήτριας λοίμωξης ή λοίμωξης που αποκτάται μετά τη γέννηση.

Ποσοτική μέθοδος ELISA

Το αποτέλεσμα των διαγνωστικών ELISA (με χρήση αναλυτή ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας) εκδίδεται σε ορισμένες μονάδες μέτρησης:
— Η οπτική πυκνότητα (OD) ενός δείγματος είναι η συγκέντρωση ειδικών αντισωμάτων ανά μονάδα όγκου.

Όσο υψηλότερη είναι η OD του δείγματος, τόσο μεγαλύτερη είναι η συγκέντρωση αντισώματος. Μερικά από τα αποτελέσματα μιλούν για τον συντελεστή θετικότητας (PC) - αυτή είναι και η οπτική πυκνότητα του δείγματος.
— Μονάδες συγκέντρωσης αντισωμάτων (νανογραμμάριο/χιλιοστόλιτρο ή ng/mL).

- Με τη μορφή τίτλων ορού: 1:20, 1:40, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1200 και ούτω καθεξής. Οι διαγνωστικοί τίτλοι (στους οποίους διαγιγνώσκεται η ασθένεια και όχι το γεγονός της μόλυνσης) είναι διαφορετικοί για διαφορετικές ασθένειες.
- Με τη μορφή συμβόλων - "+", "-", "?" (+, ++, +++, ++++).
- Με τη μορφή ποιοτικής αξιολόγησης σύμφωνα με δεδομένο κριτήριο (θετικά ή αρνητικά).

Αξιολογήστε σωστά την ποσότητα των αντισωμάτων, μια παραλλαγή της κατηγορίας ανίχνευσης των ανοσοσφαιρινών και, ως εκ τούτου, μόνο ένας γιατρός μπορεί να καθορίσει το στάδιο της νόσου και την ανάγκη για θεραπεία.

Δεν πρέπει να ξεχνάμε ότι για οποιοδήποτε σύστημα δοκιμής, αναπτύσσονται οι δικές τους «τιμές αναφοράς» (παραλλαγές του κανόνα), εάν ξεπεραστούν, διαγιγνώσκεται μια συγκεκριμένη ασθένεια (παραλλαγές παθολογίας).

Για διαφορετικά συστήματα δοκιμών, οι "τιμές αναφοράς" είναι διαφορετικές.

Μια σωστή σύγκριση των αποτελεσμάτων της ELISA που λαμβάνονται σε δυναμική είναι δυνατή μόνο εάν γίνονται στο ίδιο εργαστήριο.

Η λοιμωξιολόγος Bykova N.I.