اختبار كومبس كيف يتم ذلك. فقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي

25.08.2020

اختبار كومبس المباشر... بمساعدة هذا الاختبار ، تم إثبات وجود الأجسام المضادة التي تم تثبيتها بواسطة كريات الدم الحمراء لدى الطفل. يشير الاختبار المباشر الإيجابي إلى التحسس وهو علامة مقنعة مرض انحلاليحديثي الولادة حتى قبل ظهور العلامات السريرية الأخرى. كاستثناء ، وفقط في الحالات الشديدة جدًا ، قد يكون اختبار كومبس المباشر سلبيًا بسبب بداية انحلال الدم شبه الكامل لكريات الدم الحمراء المحسّسة.

يتم إجراء اختبار Direct Coombs على النحو التالي: يتم وضع 5 قطرات من الدم مأخوذة من كعب الطفل في أنبوب اختبار ويضاف 5 مل من محلول ملحي. يقلب جيدا مع الطرد المركزي لمدة 10 دقائق. يتم فصل سائل صافٍ فوق رواسب كرات الدم الحمراء. ثم يضاف 5 مل من المحلول الفسيولوجي مرة أخرى ، ويخلط ويطرد. بعد الاختلاط ثلاث مرات بالمحلول الملحي ، يتم غسل كريات الدم الحمراء جيدًا. بعد الفصل الأخير للمادة الطافية ، يتم خلط رواسب كرات الدم الحمراء بكمية 0.1 مل مع 0.9 مل من محلول ملحي. ضع 2-3 قطرات من هذا الخليط على شريحة زجاجية وأضف قطرة واحدة من مصل كومبس. يشير وجود التراص إلى أن التفاعل إيجابي (اختبار كومبس المباشر الإيجابي). يجب إجراء الدراسة في درجة حرارة الغرفة أعلى من 16 درجة لتجنب تأثير الراصات الباردة.

عينة غير مباشرةكومبسبمثابة دليل على وجود أجسام مضادة حرة في مصل الأم ويتم إجراؤها مع مصل الأم.

عادة ما يظهر مرض انحلال الدم عند حديثي الولادة مع عدم توافق عامل ريسس بعد الحمل الثاني. يولد الطفل الأول بصحة جيدة ، والثاني بعلامات فقر دم خفيف ، وفقط بعد الحمل الثالث يولد الأطفال بعلامات واضحة على مرض الانحلالي. فقط في النساء ذوات الحساسية المسبقة ، حتى أثناء الحمل الأول ، يمكن أن يولد طفل يعاني من أعراض مرض الانحلالي. في بعض الحالات ، يتسبب التحصين في الإجهاض والإملاص. بالنسبة لظهور المرض وشدته ، فإن حالة المشيمة ومدة تعرض الجنين لراكبات الأم مهمة. عندما تظهر agglutinins قبل الولادة بـ 10-14 أسبوعًا ، عادة ما يتم ملاحظة الأشكال تحت الإكلينيكية عند الطفل. يؤدي الظهور المبكر للجلوتينين ، قبل الولادة بـ15-26 أسبوعًا ، إلى أشكال حادة من المرض. في جميع أشكال المرض ، العملية الرئيسية هي انحلال الدم. نتيجة تفاعل الأجسام المضادة للمستضد هي انحلال الدم ، تلف الشعيرات الدموية الكبدية والدماغية. اعتمادًا على الآفة السائدة ، يتم ملاحظة أشكال مختلفة من المرض. بعض الظواهر التأقية خطيرة أيضًا. تؤدي إلى تكوين مواد شبيهة بالهيستامين تسبب أضرارًا جسيمة للخلية الكبدية وخاصة الخلايا العقدية للنواة القاعدية وقرن الأمونيوم والنخاع المستطيل وحتى القشرة الدماغية. عندما تتلف خلايا الكبد ، يضاف اليرقان الكبدي إلى اليرقان خارج الكبد. يموت الأطفال بأعراض شديدة من اليرقان النووي. إذا بقوا على قيد الحياة ، تظل أعراض الهزيمة الجهاز العصبي(اضطرابات من الجهاز خارج السبيل الهرمي مع حركات ترقق الرقص ، نوع من المشي الراقص ، حركات قسرية للرأس ، أحيانًا اضطراب تنسيق الحركات الإرادية مع السقوط المتكرر ، زيادة توتر العضلات ، التخلف العقلي ، أي مع علامات ما يسمى باعتلال الدماغ posticteria infantum).

اختبار كومبس

اختبار Direct Coombs هو اختبار مضاد للجلوبيولين (التراص في هلام ، والذي يسمح باكتشاف الأجسام المضادة ثنائية التكافؤ الكاملة) ، بمساعدة الأجسام المضادة IgG ومكون C3 المكمل على سطح كريات الدم الحمراء. عادة ، الأجسام المضادة التي تم الكشف عنها عن طريق اختبار كومبس المباشر لها خصوصية واسعة لا ترتبط بمستضد راسخ. يشير اختبار كومبس المباشر الإيجابي بوضوح إلى وجود فقر الدم الانحلالي في المريض ، على الرغم من أنه لا يعاني جميع المرضى الذين لديهم اختبار مضاد للجلوبيولين إيجابي مباشر من هذا المرض. في ما يقرب من 10 ٪ من المرضى ، لا يمكن الكشف عن الأجسام المضادة أو المكونات المكملة على غشاء كرات الدم الحمراء من خلال اختبار كومبس المباشر (سلبي الاختبار) ، ولكن مع ذلك ، يعانون من فقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي. لتوضيح خصوصية الأجسام المضادة في مثل هذه الحالات ، يتم استخدام الاختبارات مع شطفها. عادة ما يرتبط اختبار كومبس المباشر ، والذي يكون إيجابيًا فقط للمكمل ، بأجسام مضادة IgM الباردة. في هذه الحالة ، لا توجد الأجسام المضادة IgM في كريات الدم الحمراء في درجة حرارة الجسم القاعدية. ومع ذلك ، نظرًا لحقيقة أن الأجسام المضادة IgM تعمل بشكل فعال على إصلاح المكمل ، ويبقى المكمل على كريات الدم الحمراء ، مع هذا النوع من فقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي (مرض aggutinin البارد) ، سيكون اختبار Coombs إيجابيًا فقط للمكمل.

يُعد اختبار Direct Coombs إيجابيًا لفقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي الناجم عن الأجسام المضادة الدافئة ، وفقر الدم الناتج عن المناعة الذاتية (عند تناول ميثيل دوبا ، يكون لدى 20٪ من المرضى رد فعل إيجابي) ، ونوع الممتز من فقر الدم الانحلالي ، ونوع المركب المناعي لفقر الدم الانحلالي (اختبار) تكون موجبة فقط لنسبة C3) فقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي الناجم عن الأجسام المضادة للبرد - مرض الراصات الباردة (الاختبار إيجابي فقط لـ C3). مع بيلة الهيموجلوبين الباردة الانتيابية ، يكون اختبار كومبس المباشر سلبيًا.
في الفترة الحادة من المرض ، بسبب تدمير كريات الدم الحمراء ، حيث تم تسجيل عدد كبير من الأجسام المضادة ، مع وجود أزمة انحلالي ، وكذلك مع وجود كمية غير كافية من الأجسام المضادة في المسار المزمن للمرض ، وهو تأثير سلبي مباشر يمكن ملاحظة اختبار كومبس.

:

شرط مهم لضمان الجودة البحوث المخبريةتؤخذ عينة الدم على معدة فارغة في الصباح (قبل الساعة 12:00).
قبل 12 ساعة من الدراسة ، يجب استبعاد تناول الكحول والتدخين وتناول الطعام ، ويجب الحد من النشاط البدني.
في صباح يوم أخذ عينات الدم ، يمكنك شرب الماء.
استبعاد تناول الأدوية إذا لم يكن من الممكن إلغاء الدواء ، يجب عليك إبلاغ المختبر بذلك.
يُنصح بأخذ المواد قبل القيام بأي إجراءات تشخيصية طبية.
عند تقييم مستوى الهرمونات لدى النساء ، من المهم مراعاة يوم الدورة الشهرية ، عندما يكون تحديد بعض الهرمونات هو الأمثل. يمكنك الحصول على هذه المعلومات من طبيبك.

فهرس	صفة مميزة
نظام المحلل والاختبار	بطاقات جل DiaMed AG (سويسرا)
القيم المرجعية	نتيجة سلبية / نتيجة إيجابية
العوامل المتداخلة. دواء
يمكن إجراء اختبار إيجابي عند تناول الأدوية التالية: أسيتامينوفين ، وحمض الساليسيليك ، وأمينوبيرين ، مضادات الهيستامين، كاربرومال ، سيفالوسبورينات ، كلوربرومازين ، كلوربروباميد ، سيسبلاتين ، كلونيدين ، ديبيرون ، إيثوسكسيميد ، فينفلورامين ، فوادين ، هيدرالازين ، هيدروكلوروثيازيد ، إيبوبروفين ، أنسولين ، إيزونيازيد ، ليفودوبا ، ميفينيلانيدين ، بروكسيدونيدين ، ميفينيدلينيد ، ميثيلانيدين ريفامبين ، ستربتومايسين ، سلفوناميدات ، مشتقات سلفونيل يوريا ، تتراسيكلين ، تريامتيرين ، أنهيدريد ثلاثي
مؤشرات للتعيين
تشخيص فقر الدم الانحلالي المناعي ، مرض الانحلالي عند الأطفال حديثي الولادة ، فقر الدم الانحلالي المناعي الدوائي ، تفاعلات نقل الدم الانحلالي
تفسير النتائج
اختبار كومبس العادي المباشر سلبي. اختبار كومبس الإيجابي في: فقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي. مرض انحلالي لحديثي الولادة. فقر الدم الانحلالي المناعي الطبي. تفاعلات نقل الدم الانحلالي

اختبار التراص لتحديد الأجسام المضادة ضد الريسوس (تفاعل كومبس غير المباشر)تطبيقفي المرضى الذين يعانون من انحلال الدم داخل الأوعية الدموية. في بعض هؤلاء المرضى ، تم العثور على أضداد ريسوس غير مكتملة ، أحادية التكافؤ. تتفاعل على وجه التحديد مع كريات الدم الحمراء الموجبة للعامل الريصي ، ولكنها لا تتسبب في تراصها. يتم تحديد وجود مثل هذه الأجسام المضادة غير المكتملة من خلال اختبار كومبس غير المباشر. للقيام بذلك ، يتم إضافة مصل مضاد الغلوبولين (الأجسام المضادة ضد الغلوبولين المناعي البشري) إلى نظام الأجسام المضادة للريسوس + كريات الدم الحمراء الموجبة للعامل الريصي ، والتي تسبب تراص كريات الدم الحمراء. باستخدام تفاعل كومبس ، يتم تشخيص الحالات المرضية المرتبطة بالتحلل داخل الأوعية الدموية لكريات الدم الحمراء ذات المنشأ المناعي ، على سبيل المثال ، مرض انحلال الدم عند الأطفال حديثي الولادة: تتحد كريات الدم الحمراء لجنين موجب عامل الريسوس مع أجسام مضادة غير مكتملة لعامل الريزوس المنتشر في الدم. عبرت المشيمة من أم سلبية عامل ريسس.

آلية... ترجع صعوبة اكتشاف الأجسام المضادة غير الكاملة (أحادية التكافؤ) إلى حقيقة أن هذه الأجسام المضادة ، المرتبطة بحلقات مستضد معين ، لا تشكل بنية شبكية ولا يتم اكتشاف التفاعل بين المستضدات والأجسام المضادة عن طريق التراص أو الترسيب أو غيرهما الاختبارات. لتحديد معقدات الجسم المضاد المستضد المتكونة ، يجب استخدام أنظمة اختبار إضافية. للكشف عن الأجسام المضادة غير المكتملة ، على سبيل المثال ، لمستضد Rh لخلايا الدم الحمراء في مصل دم المرأة الحامل ، يتم إجراء التفاعل على مرحلتين: 1) يتم إضافة خلايا الدم الحمراء التي تحتوي على مستضد Rh إلى تخفيفين من مصل الاختبار وحفظها عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة ؛ 2) يضاف مصل الأرانب المضاد للجلوبيولين البشري (في تخفيف عمل معاير سابقًا) إلى كريات الدم الحمراء التي يتم غسلها جيدًا بعد المرحلة الأولى. بعد الحضانة لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية ، يتم تقييم النتائج من خلال وجود التراص الدموي (تفاعل إيجابي). من الضروري التحكم في مكونات التفاعل: 1) مصل مضاد للجلوبيولين + كريات الدم الحمراء الحساسة بشكل واضح بأجسام مضادة محددة ؛ 2) كريات الدم الحمراء تعامل بمصل طبيعي + مصل مضاد للجلوبيولين ؛ 3) كريات الدم الحمراء سالبة عامل الريس المعالجة بالمصل المدروس + مصل مضاد الجلوبيولين.

50. تفاعل التراص الدموي السلبي. آلية. عناصر. طلب.

تفاعل التراص الدموي غير المباشر (السلبي)(RNGA ، RPGA)يعتمد على استخدام كريات الدم الحمراء (أو اللاتكس) مع المستضدات أو الأجسام المضادة الممتصة على سطحها ، والتي يؤدي تفاعلها مع الأجسام المضادة أو مستضدات مصل الدم للمرضى إلى التصاق كريات الدم الحمراء ببعضها وتسقط في قاع أنبوب أو خلية اختبار على شكل رواسب صدفيّة.

عناصر.لإنتاج RNGA ، يمكن استخدام كريات الدم الحمراء في الكبش والحصان والأرانب والدجاج والفأر والإنسان وغيرها ، والتي يتم حصادها للاستخدام المستقبلي ، ومعالجتها بالفورمالين أو الجلوتارالدهيد. تزداد قدرة امتصاص كريات الدم الحمراء عند معالجتها بمحلول التانين أو كلوريد الكروم.

يمكن أن تكون المستضدات الموجودة في RNGA عبارة عن مستضدات عديد السكاريد للكائنات الحية الدقيقة ، ومستخلصات اللقاحات البكتيرية ، ومستضدات الفيروسات والريكتسيا ، بالإضافة إلى مواد أخرى.

تسمى كريات الدم الحمراء المحسوسة بارتفاع ضغط الدم بتشخيص كرات الدم الحمراء. لتحضير تشخيص الكريات الحمراء ، غالبًا ما تستخدم كريات الدم الحمراء ، والتي لها نشاط امتصاص عالي.

طلب... يستخدم RNGA لتشخيص الأمراض المعدية ، لتحديد هرمون موجهة الغدد التناسلية في البول عند حدوث الحمل ، للكشف عن فرط الحساسية للأدوية والهرمونات وفي بعض الحالات الأخرى.

آلية... يتميز اختبار التراص الدموي غير المباشر (RNGA) بحساسية وخصوصية أعلى بكثير من اختبار التراص. يتم استخدامه لتحديد العامل الممرض من خلال تركيبه المستضدي أو للإشارة إلى المنتجات البكتيرية - السموم في المادة المرضية المدروسة وتحديدها. وفقًا لذلك ، يتم استخدام تشخيصات الأجسام المضادة القياسية (التجارية) ، والتي يتم الحصول عليها عن طريق امتصاص أجسام مضادة معينة على سطح كريات الدم الحمراء المعالجة بالتانين (المعالجة بالتانين). يتم تحضير التخفيفات التسلسلية لمواد الاختبار في آبار الألواح البلاستيكية. ثم يتم إضافة نفس الحجم من معلق بنسبة 3٪ من كريات الدم الحمراء المحملة بالأجسام المضادة إلى كل بئر. إذا لزم الأمر ، يتم وضع التفاعل بالتوازي في عدة صفوف من الآبار مع كريات الدم الحمراء محملة بأجسام مضادة من نوعية مجموعة مختلفة.

بعد ساعتين من الحضانة عند 37 درجة مئوية ، ضع في الاعتبار النتائج وتقييمها مظهر خارجيرواسب كريات الدم الحمراء (بدون اهتزاز): مع تفاعل سلبي ، تظهر الرواسب على شكل قرص مضغوط أو حلقة في قاع البئر ، مع رد فعل إيجابي ، رواسب مزركشة مميزة من كريات الدم الحمراء ، طبقة رقيقة ذات حواف غير متساوية .

عادة ، الأجسام المضادة لخلايا الدم الحمراء غائبة في الدم.

اختبار Direct Coombs هو اختبار مضاد للجلوبيولين (التراص في هلام ، والذي يسمح باكتشاف الأجسام المضادة ثنائية التكافؤ الكاملة) ، بمساعدة الأجسام المضادة IgG ومكون C3 المكمل على سطح كريات الدم الحمراء. عادة ، الأجسام المضادة التي تم الكشف عنها عن طريق اختبار كومبس المباشر لها خصوصية واسعة لا ترتبط بمستضد راسخ. يشير اختبار كومبس المباشر الإيجابي بوضوح إلى وجود فقر الدم الانحلالي في المريض ، على الرغم من أنه لا يعاني جميع المرضى الذين لديهم اختبار مضاد للجلوبيولين إيجابي مباشر من هذا المرض. في حوالي 10٪ من المرضى ، لا يمكن الكشف عن الأجسام المضادة أو المكونات التكميلية على غشاء كرات الدم الحمراء من خلال اختبار كومبس المباشر (اختبار سلبي) ، لكنهم مع ذلك يعانون من فقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي. لتوضيح خصوصية الأجسام المضادة في مثل هذه الحالات ، يتم استخدام الاختبارات مع شطفها. عادة ما يرتبط اختبار كومبس المباشر ، الذي يكون إيجابيًا فقط للمكمل ، بأجسام مضادة IgM الباردة. في هذه الحالة ، لا توجد الأجسام المضادة IgM في كريات الدم الحمراء في درجة حرارة الجسم القاعدية. ومع ذلك ، نظرًا لحقيقة أن الأجسام المضادة IgM تعمل بشكل فعال على إصلاح المكمل ، ويبقى المكمل على كريات الدم الحمراء ، مع هذا النوع من فقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي (مرض aggutinin البارد) ، سيكون اختبار Coombs إيجابيًا فقط للمكمل.

اختبار كومبس غير المباشر - اختبار مضاد الغلوبولين غير المباشر (يكتشف الأجسام المضادة غير الكاملة) يكتشف الأجسام المضادة غير النمطية في الدم ، بما في ذلك الأجسام المضادة ، لمولدات المضادات الأجنبية من كريات الدم الحمراء. حصلت على اسمها (غير مباشر) بسبب حقيقة أنها تسير على مرحلتين. في البداية ، يتفاعل مصل دم المريض ، الذي يحتوي على أجسام مضادة غير مكتملة ، مع Ag-Diagnosticum العضلي الإضافي بدون مظاهر مرئية. في المرحلة الثانية ، يتفاعل مصل مضاد الغلوبولين المضاف مع الأجسام المضادة غير المكتملة الممتصة على المستضدات ، مع ظهور راسب مرئي. يعتبر نقل كريات الدم الحمراء المتماثل (الخيفي) أو الحمل هو الأكثر الأسباب الشائعةتشكيل هذه الأجسام المضادة لكريات الدم الحمراء. إن الجمع بين اختبار كومبس الإيجابي غير المباشر والاختبار المباشر السلبي لا يفعل شيئًا لتشخيص فقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي. يسبب اختبار كومبس الإيجابي غير المباشر صعوبات معينة في اختيار الدم لنقل الدم والاختبار المتبادل للتوافق مع الدم المحفوظ ، ولكن ليس له قيمة تشخيصية أخرى.

تم اقتراح اختبار مضاد الجلوبيولين ، المصمم للكشف عن الأجسام المضادة غير المكتملة لمضادات كرات الدم الحمراء ، من قبل كومبس ، مورانت ، ريس في عام 1945 ، وحصل لاحقًا على اسم اختبار كومبس. الجوهر هذه الطريقةيكمن في حقيقة أن مصل مضاد الجلوبيولين الذي يحتوي على أجسام مضادة للجلوبيولين المناعي البشري ، عند التفاعل مع كريات الدم الحمراء المحسّسة بأجسام مضادة غير كاملة ، يؤدي إلى تراصها.

اعتمادًا على ما إذا كانت الأجسام المضادة مثبتة على سطح كريات الدم الحمراء أو في حالة حرة في بلازما الدم ، يتم استخدام اختبار كومبس المباشر أو غير المباشر.

يتم إجراء اختبار كومبس المباشر في الحالات التي يوجد فيها سبب للاعتقاد بأن خلايا الدم الحمراء قيد الدراسة موجودة بالفعل في الجسم الحيتم تحسسهم بالأجسام المضادة المناسبة ، أي المرحلة الأولى من التفاعل - تثبيت الأجسام المضادة على سطح كريات الدم الحمراء - حدثت في الجسم وتسبب الإضافة اللاحقة لمصل مضاد الجلوبيولين في تراص الخلايا الحساسة.

باستخدام اختبار كومبس غير المباشر ، يتم الكشف عن الأجسام المضادة غير الكاملة الموجودة في مصل الاختبار. في هذه الحالة ، يستمر التفاعل على مرحلتين. المرحلة الأولى هي حضانة كريات الدم الحمراء مع مصل الاختبار ، حيث يتم تثبيت الأجسام المضادة الموجودة في عينة مصل الاختبار على سطح كريات الدم الحمراء. المرحلة الثانية هي إضافة مصل مضاد الجلوبيولين.

حتى الآن ، يستخدم اختبار كومبس على نطاق واسع في الممارسة المختبرية لتشخيص الحالات المرضية المناعية ، ولا سيما لفقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي ، الذي يتميز بتدمير كريات الدم الحمراء بسبب ارتباط غشاء الخلية بالأجسام المضادة و (أو) مكونات المكمل. النظام. بمساعدتها ، يتم الكشف عن وجود Ig G (عادةً Ig G1 و Ig G3) على غشاء كرات الدم الحمراء ، والذي يمكن أن ينشط المكمل ، وأحيانًا يكمل (C3d). ومع ذلك ، في الفترة الحادة من المرض بسبب تدمير كريات الدم الحمراء ، حيث تم تثبيت عدد كبير من الأجسام المضادة ، مع أزمة انحلالي ، وكذلك مع وجود كمية غير كافية من الأجسام المضادة في المسار المزمن للمرض ، سلبي يمكن ملاحظة اختبار كومبس المباشر.

يجب التأكيد على أن اختبار كومبس غير المباشر يظل أفضل طريقة للاختيار الفردي لوسائط نقل الدم ، لأنه يتيح التحديد الأكثر دقة للتوافق الفردي بين المتبرع والمتلقي من حيث مستضدات كرات الدم الحمراء.

يوصى بإجراء إضافي لاختبار مضاد الجلوبيولين المباشر لوجود الأجسام المضادة الذاتية عند فحص جميع متلقي الأعضاء والأنسجة في فترة ما قبل الزرع ومتلقي الخلايا الجذعية المكونة للدم أيضًا بعد الزرع.

بالإضافة إلى علم الدم المناعي ونقل الدم ، تُستخدم اختبارات مضادات الغلوبولين على نطاق واسع في تشخيص عدد من الحالات المرضية: في أمراض الدم ، بما في ذلك أمراض التكاثر اللمفاوي ، في أمراض جهازيةالنسيج الضام ، مرض سجوجرن ، التهاب الكبد المزمن النشط ، إلخ.

تُستخدم اختبارات كومبس بنشاط في علم الوراثة الطبية والطب الشرعي لتحديد مستضدات كريات الدم الحمراء السطحية.

يشير اختبار كومبس إلى طريقة بحث شاقة تتطلب عناية خاصة في تنفيذها. عند استخدامه ، هناك بعض الصعوبات المرتبطة ، على وجه الخصوص ، بتفسير ردود الفعل الإيجابية الضعيفة. من المعروف أن التفاعلات الإيجابية أو السلبية الخاطئة عند إجراء اختبارات كومبس يمكن أن تكون نتيجة لغسل كريات الدم الحمراء بشكل غير كافٍ ، وتحييد كاشف مضاد الغلوبولين بآثار مصل الدم ، وكذلك التلامس مع سطح غير دهني يمكن لمضاد الغلوبولين أن يتواجد عليه. يتم إصلاحها ، وبالتالي تفقد نشاطها. عيب آخر في اختبار كومبس هو عدم استقرار كاشف مضاد الجلوبيولين ، الذي يتميز إنتاجه وتخزينه بسمات معينة ، مما يجعل من الصعب أيضًا تحديد تفاعل التراص الدموي مع مصل مضاد الجلوبيولين.

بالإضافة إلى ذلك ، الدراسات التي أجراها أ. هولبورن ، د. فواك وآخرون. أظهرت أن سبب النتائج السلبية الكاذبة يمكن أن يكون الهز المفرط أثناء إعادة تعليق خلايا الدم الحمراء. يمكن أن تحدث النتائج الخاطئة عند إجراء اختبارات مضادات الغلوبولين أيضًا بسبب وجود خليط من الأجسام المضادة التكميلية في كاشف مضاد الغلوبولين ، لا سيما المكونات التكميلية C3d و C3c و C4c و C4d ، والتي يتم امتصاصها على سطح خلايا الدم الحمراء للاختبار أثناء الحضانة وخلق مظهر نتيجة إيجابية.

يمكن التخلص من هذه العيوب بسهولة بالغسيل الدقيق لعينات الاختبار والتحكم في ظروف التفاعل.

في العقد الماضي ، تم استخدام محلول متساوي التوتر منخفض القوة الأيونية (LISS) لتقصير وقت اختبار كومبس غير المباشر وزيادة حساسيته.

الميزة التي لا جدال فيها لاختبارات مضادات الغلوبولين ، وفقًا لعدد من المؤلفين ، هي حساسيتها العالية ، والتي تتجاوز بشكل كبير دقة طرق البحث البديلة التي تستخدم للكشف عن الأجسام المضادة غير التراصية.

لقد قارنا دقة طرق اختبار مصل الدم لوجود أجسام مضادة غير مكتملة باستخدام مصل بولي جلوسين ، جيلاتين ومضاد الغلوبولين. في سياق الدراسة ، تمت مراقبة عيارات الأجسام المضادة غير المكتملة لـ D-D في 140 عينة من مصل الدم من متبرعين متساويين باستخدام اختبارات الجيلاتين والبولي جلوسين ومضادات الغلوبولين غير المباشرة. تم تنفيذ صياغة هذه الأساليب وفقًا للطرق المقبولة عمومًا.

وجد أنه من حيث الدقة ، فإن طرق الكشف عن حساسية كريات الدم الحمراء بالأجسام المضادة لـ D يتم ترتيبها على النحو التالي: الأكثر حساسية هو اختبار كومبس غير المباشر ، ثم اختبار الجيلاتين والأقل إفادة هو اختبار البولي جلوسين. تتوافق النتائج التي تم الحصول عليها في هذه السلسلة من التجارب تمامًا مع بيانات الأدبيات ، مما يسمح لنا باستنتاج أن حساسية اختبارات كومبس عالية جدًا ، مما يجعل من الممكن التعرف بدرجة عالية من الموثوقية على وجود مضادات الكريات الحمر. الأجسام المضادة في الجسم التي لا تسبب تراص خلايا الدم الحمراء.

ومع ذلك ، عند إجراء اختبارات كومبس في الممارسة العملية ، هناك حالات لا يتم فيها اكتشاف الأجسام المضادة غير المكتملة ، على الرغم من أن الصورة السريرية للمرض أو التحصين السابق تشير إلى احتمال وجودها. في مثل هذه الحالات ، يمكن الافتراض أن كمية الأجسام المضادة غير كافية لكي يتم ترسيخها بواسطة الأجسام المضادة في الدم المضادة للجلوبيولين.

تم تأكيد هذا الاستنتاج من خلال تجربتنا الخاصة ، والتي تم من خلالها ، باستخدام طريقة التحليل الكهربائي الدقيق للخلايا ، إثبات وجود أجسام مضادة لـ D على كريات الدم الحمراء للاختبار ، والتي لم يتم اكتشافها في اختبار كومبس غير المباشر. في هذه السلسلة من التجارب ، تمت إضافة مصل مضاد الجلوبيولين إلى كريات الدم الحمراء المحتضنة مسبقًا بمصل تم الحصول عليه من دم المتبرعين المحصنين خلال فترة التكوّن المضاد قيد الاستخدام ، أي خلال الفترة التي لم يتم فيها اكتشاف الأجسام المضادة فيها بالطرق المعروفة ، بما في ذلك اختبار كومبس.

في الدراسات التي أجريت ، كان الدليل على وجود أجسام مضادة غير مكتملة على سطح كريات الدم الحمراء إحصائيًا. تغيير ملحوظحجم الحركة الكهربي لخلايا الدم الحمراء المحسّسة بعد إضافة مصل مضاد الجلوبيولين. تجدر الإشارة إلى أنه بعد ذلك ، تم تحديد الأجسام المضادة لـ D في مصل الدم لجميع المتبرعين المحصنين في اختبار Coombs غير المباشر.

جيليراند وآخرون. أظهر أيضًا أن اختبارات مضادات الغلوبولين تتميز بعتبة معينة من الحساسية: يتم ملاحظة النتيجة الإيجابية فقط عندما يتم تثبيت 500 Ig G على الأقل على سطح خلية حمراء واحدة.

بالإضافة إلى ذلك ، تقدم الأدبيات دليلًا على أن النتيجة السلبية المحتملة لاختبار كومبس قد تترافق مع تقارب منخفض للأجسام المضادة التي تحسس كريات الدم الحمراء ، ونتيجة لذلك يتم التخلص منها بسهولة من سطح خلايا الدم الحمراء أثناء عملية الغسيل. .

مع الأخذ في الاعتبار ما سبق ، يمكننا أن نستنتج أنه في بعض الحالات لا تكون النتيجة السلبية لاختبار كومبس دليلًا على عدم وجود أجسام مضادة مثبتة على سطح كريات الدم الحمراء.

من المعروف أن تفاعلات كومبس محددة للغاية ويمكنها اكتشاف معظم أنواع الأجسام المضادة غير المكتملة. ومع ذلك ، كما تظهر بعض البيانات التجريبية ، يمكن أن تكون اختبارات مضادات الغلوبولين إيجابية في الحالات غير المناعية. إي مويرهيد وآخرون. في اليوم الثاني بعد تناول فينيل هيدرازين ، لوحظ أن اختبار كومبس إيجابي للكلاب. مثل هذا الظهور السريع للتفاعل الإيجابي هو دليل ضد طبيعته المناعية ، وبدلاً من ذلك ، يرتبط بامتصاص غير محدد للبروتين على سطح كريات الدم الحمراء.

وليامز وآخرون. وجد أن حمض الكلافولانيك يمكن أن يسبب أيضًا تفاعلًا إيجابيًا ، والذي ، وفقًا للمؤلفين ، مرتبط بامتصاص غير محدد لبروتينات البلازما على سطح كرات الدم الحمراء. لوحظ تأثير مماثل مع المضادات الحيوية من السيفالوسبورين.

يؤكد مؤلفو الدراسات المذكورة أعلاه على الطبيعة غير المناعية للنتائج الإيجابية التي تم الحصول عليها من اختبارات كومبس ويصرون على أن هذه المواد قادرة على إحداث تعديل في أغشية خلايا الدم الحمراء ، ونتيجة لذلك يمكن لخلايا الدم الحمراء أن تمتص البروتينات ( على وجه الخصوص ، الألبومين) ، الموجود عادة في بلازما الدم ولا يمتلك خصائص الأجسام المضادة. بالإضافة إلى ذلك ، من الممكن أن تكون الكائنات الحية الغريبة ، التي يتم امتصاصها على سطح الخلية ، بمثابة رابط بين غشاء الخلية وبروتينات البلازما.

للحصول على تفسير صحيح لنتائج اختبار مضادات الغلوبولين ، يجب أيضًا مراعاة النسبة الكمية بين كريات الدم الحمراء الشابة والناضجة في الدم المحيطي. وجد أن الخلايا الشبكية التي تفرز من الجسم خلال فترة تجديد الإريثرون المعزز يمكن أن تتراكم بواسطة مصل مضاد الجلوبيولين.

اختبار مضاد الجلوبيولين الإيجابي المباشر ، el. ويلاحظ أيضا مع مختلف الظروف المرضيةمصحوبًا باضطرابات في الجهاز المناعي ، عمليات التهابية تؤدي إلى امتزاز غير محدد للأجسام المضادة ذات النوعية المختلفة على أغشية كريات الدم الحمراء. يشير هذا إلى أن جزيئات Ig G لا تتفاعل مع مستضدات معينة من كريات الدم الحمراء ، ولكنها ثابتة فقط على سطح الخلايا قيد الدراسة.

يجب أن يؤخذ في الاعتبار أنه عند إجراء اختبار كومبس في حالات الأمراض التي تتميز بتطور خلل البروتين في الدم أو ظهور البروتينات ، فإن النتيجة الإيجابية ترجع إلى وجود كريات الدم الحمراء على السطح من البروتينات التي ليس لها خصائص من الأجسام المضادة ، مما يشير أيضًا إلى عدم كفاية خصوصية عينات مضادات الغلوبولين فيما يتعلق بطبيعة البروتين الذي تم اكتشافه بمساعدتهم.

وهكذا ، كما أظهرت العديد من الدراسات ، فإن النتائج الإيجابية لاختبارات مضادات الغلوبولين المباشرة وغير المباشرة ليست دليلاً مطلقًا على وجود الأجسام المضادة ، حيث يمكن ملاحظة التفاعلات الإيجابية في حالات مرضية مختلفة لا ترتبط بالتحسس الذاتي أو التحسس الذاتي للجسم. لذلك ، فقط مقارنة نتائج عدة طرق مناعية مع الصورة السريريةيسمح لك المرض بالحكم الكامل على العملية المرضية النامية.

عادةً ما يشير اختبار مضاد الغلوبولين الإيجابي غير المباشر مع اختبار مباشر سلبي إلى وجود أضداد خيفية مجانية في مصل الدم المدروس ، مرتبطة بعمليات نقل الدم أو حالات الحمل السابقة.

غالبًا ما يكون اختبار كومبس إيجابيًا مع تفاقم بيلة الهيموغلوبينية الليلية الانتيابية ؛ يعد اختبار كومبس الإيجابي مع مضادات C3 ومضاد C3dg علامة على مرض الراصات الباردة.

في الحالات التي يكون فيها خطر الإصابة بمرض انحلال الأطفال حديثي الولادة مرتفعًا ، تكون نتائج اختبارات مضادات الغلوبولين المباشرة وغير المباشرة ذات أهمية كبيرة لإجراء التشخيص (غالبًا أثناء الحمل) ، وإذا لزم الأمر ، المراقبة الديناميكية للمظهر والتغيير في الجسم المضاد عيار. في أغلب الأحيان ، يرتبط المرض الانحلالي عند الأطفال حديثي الولادة بعدم توافق الأم والجنين مع المستضد D ، وفي كثير من الأحيان أقل لمولدات المضادات من نظام AB0 ، وحتى أقل في كثير من الأحيان مع المستضدات الأخرى (C ، C ، K ، إلخ). النمل الناتج la ، كقاعدة عامة ، يتم اكتشاف الأجسام المضادة غير المكتملة من فئة Ig G بوضوح في اختبار مضاد الغلوبولين غير المباشر. في هذا المرض ، يعتبر العيار الصحيح ونوعية الأجسام المضادة المحددة ذات أهمية كبيرة ، حيث يوجد ارتباط معين بين مستوى الأجسام المضادة للكريات الحمر في دم المرأة الحامل والتشخيص المحتمل لشدة مرض الانحلالي.

اختبار كومبس غير المباشر مطلوب أيضًا في الممارسة السريرية لضمان علاج نقل الدم الآمن. يعد تنفيذه مكونًا إلزاميًا للدراسات المناعية الدموية للمتبرعين وفئات مختلفة من المستفيدين ، بالإضافة إلى الفحوصات الروتينية لجميع مرضى المؤسسات الطبية الذين قد يحتاجون إلى نقل الدم ومكوناته.

يستخدم اختبار مضاد الغلوبولين غير المباشر في الحالات التالية:

من أجل تحديد أكثر دقة للانتماء Rh (المستضد D) مع نتائج غير واضحة لتحديد عامل Rh بطرق أخرى (بولي جلوسين ، جيلاتين ، إلخ) ؛

للكشف عن مستضدات كرات الدم الحمراء الضعيفة (Kell ، Duffy ، Kidd ، أنظمة Lewis ، إلخ) والأجسام المضادة لهذه المستضدات ؛

لاكتشاف وتحديد الأجسام المضادة المناعية لخلايا الدم الحمراء ، بما في ذلك الأجسام المضادة التي تسبب تفاعلات انحلال الدم بعد نقل الدم ؛

لتحديد وجود الأجسام المضادة المناعية لنظام AB0 في مضاعفات الانحلالي عند نقل الدم ؛

كاختبار للتوافق في الاختيار الفردي للدم المنقول ومكوناته.

وبالتالي ، فإن اختبار كومبس هو اختبار تشخيصي مهم يستخدم في مجالات الطب المختلفة (أمراض الدم ، والتوليد ، وأمراض الروماتيزم ، ونقل الدم ، والتشخيص السريري والمختبري ، وما إلى ذلك). ستساعد معرفة تفاصيل اختبار كومبس على زيادة موثوقية النتائج التي تم الحصول عليها وستساهم في التفسير الصحيح لبيانات المختبر.

المؤلفات

1. الأجسام المضادة. طرق / محرر. D. حقود. - م: مير ، 1991.

2. Bayramalibeyli I.E. ، Ragimov A.A. ، Gadzhiev A.B.... // علاج فقر الدم بنقل الدم: كتاب مدرسي. دليل للأطباء. - م: عملي. الطب 2005. - ص 105-106.

3. فولكوفا أويا ، فريغاتوفا إل إم ، ليفتشينكو إل بي.// نقل الدم. - 2006. - رقم 2. - ص 39-62.

4. Donskov S.I.// مجموعات الدم في نظام الريسوس: النظرية والتطبيق. - م: فينيتي ران ، 2005. - س 180-186 ، 195.

5.المناعة (الوثائق المعيارية) / شركات. اي جي. باشلاي ، إس. دونسكوف. - م: VINITI RAN ، 1998.

6.التحقيق في نظام الدم في الممارسة السريرية / إد. جي. كوزينتس ، في. ماكاروف. - م: Triada-X ، 1997.

7. ليفين ف.... إلى آلية تكوّن الكريات الحمر وتكوين الكريات الحمر في فترة فقر الدم الحاد التالي للنزف: المؤلف. ديس. ... كان. عسل. علوم. - مينسك ، 1968.

8. Rahimov A.A.، Bayramalibeyli I.E.... // أساسيات التشخيص والوقاية والعلاج من فقر الدم. - م: GOU VUNMTs MZ RF، 2002. - S. 204-209.

9. تشوماكوفا إي.... // المشاكل الفعلية لأمراض الدم ونقل الدم: وقائع المؤتمر السادس لأطباء الدم وأخصائيي نقل الدم لجمهورية بيلاروسيا ، مينسك ، 24-25 مايو 2007 / محرر. أ. Svirnovsky ، M.P. بوتابنيف. - مينسك: المركز العلمي والعملي الجمهوري لأمراض الدم ونقل الدم ، 2007. - ص 50.

10. كومبس آر ، مورانت أ ، رايس آر... // لانسيت. - 1945. - المجلد. 2. - ص 15.

11. فريدمان ج... // جى كلين. باتول. - 1979. - المجلد. 32. - ص 1014-1018.

12. هولبورن إيه إم... مراقبة الجودة. طرق في أمراض الدم / محرر.أولا كافيل. - إدنبرة: تشرشل ليفينجستون ، 1982. - المجلد. 4. - ص 34-50.

13. خان س.// CMAJ. - 2006. - المجلد. 175 ، رقم 8. - ص 919.

14. كوماتسو إف.// نيبون رينشو. - 2005. - المجلد. 63 (ملحق 7). - ص 719-721.

15. كوماتسو إف.// نيبون رينشو. - 2005. - المجلد. 63 (ملحق 7). - ص 716-718.

16. مولثان ل ، ريدنبرغ م ، إيمان م.// نيو إنجل. جيه ميد. - 1976. - المجلد. 277. - ص 123-125.

17. مويرهيد إي ، غروفزم ، براين س... // J. Lab. كلين. ميد. - 1954. - المجلد. 44. - ص 902-903.

18. روسي دبليو.// مستشفى. براك. - 1995. - رقم 105.

19. فواك د. ، داوني د. مورب.وآخرون. // Biotests Bull. - 1986. - المجلد. 1. - ص 41-52.

20. فواك د. ، هاي ت. ، داوني د.وآخرون. غسالات الخلايا لاختبارات مضادات الغلوبولين. اختبار النسخ المتماثل - طريقة جديدة توضح عدم كفاءة آلة واحدة مستخدمة على نطاق واسع - Sorvall CW1-AF2: تقرير إلى الفرع الفني لـ DHSS ، فبراير 1991.

21. ويليامز إم إي ، توماس دي ، هارمان سي بي... وآخرون. // عوامل مضادات الميكروبات والعلاج الكيميائي. - 1985. - ص 125-127.

22. Zarandona JM، Yazer M.H... // CMAJ. - 2006. - المجلد. 174 ، رقم 3. - ص 305-307.