Coombs tesztje hogyan történik. Autoimmun hemolitikus vérszegények

25.08.2020

Közvetlen Coombs-teszt... Ennek a tesztnek a segítségével bizonyítják a gyermek eritrocitáinak által rögzített blokkoló antitestek jelenlétét. A pozitív pozitív teszt szenzibilizációt jelez, és meggyőző jel hemolitikus betegség az újszülött még más klinikai tünetek megjelenése előtt. Kivételként és csak nagyon súlyos esetekben a közvetlen Coombs-teszt negatívnak bizonyulhat az érzékenyített vörösvértestek már kialakult, majdnem teljes hemolízise miatt.

A közvetlen Coombs-tesztet a következőképpen hajtják végre: a gyermek sarkából vett 5 csepp vért teszünk egy kémcsőbe, és 5 ml sóoldatot adunk hozzá. Jól keverjük össze és 10 percig centrifugáljuk. Az eritrocita üledék felett tiszta folyadékot választanak el. Ezután ismét hozzáadunk 5 ml fiziológiai oldatot, összekeverjük és centrifugáljuk. Háromszoros sóoldattal való összekeverés után az eritrocitákat jól megmossuk. A felülúszó utolsó elválasztása után az eritrocita üledéket 0,1 ml mennyiségben összekeverjük 0,9 ml sóoldattal. Tegyen 2-3 cseppet ebből a keverékből egy üveglemezre, és adjon hozzá egy csepp Coombs szérumot. Az agglutináció jelenléte azt jelzi, hogy a reakció pozitív (pozitív közvetlen Coombs-teszt). A vizsgálatot szobahőmérsékleten, 16 ° feletti hőmérsékleten kell elvégezni, hogy elkerüljük a hideg agglutininek hatását.

Közvetett minta Coombs az anyai szérumban található szabad antitestek jelenlétének bizonyítékául szolgál, és az anyai szérummal végezzük.

Rh-inkompatibilitással rendelkező újszülöttek hemolitikus betegsége általában a második terhesség után jelentkezik. Az első gyermek egészséges, a második enyhe vérszegénység jeleivel születik, és csak a harmadik terhesség után születnek olyan gyermekek, akiknek nyilvánvaló a hemolitikus betegség jele. Csak előre érzékeny nőknél, még az első terhesség alatt is születhet hemolitikus betegség tüneteivel rendelkező gyermek. Bizonyos esetekben az immunizálás abortuszt és halandó születést okozott. A betegség kialakulása és súlyossága szempontjából fontos a placenta állapota és a magzat anyai agglutinineknek való kitettségének időtartama. Amikor az agglutininek 10-14 héttel a szülés előtt megjelennek, általában egy gyermeknél szubklinikai formák figyelhetők meg. Az agglutininek korai megjelenése, 15-26 héttel a szülés előtt, a betegség súlyos formáit okozza. A betegség minden formájában a fő folyamat a hemolízis. Az antigén-antitest reakció következménye a hemolízis, a máj és az agy kapillárisainak károsodása. Attól függően, hogy melyik elváltozás érvényesül, a betegség különböző formái figyelhetők meg. Egyes anafilaxiás jelenségek szintén veszélyesek. Hisztaminszerű anyagok képződéséhez vezetnek, amelyek súlyos károsodást okoznak a májsejtben és különösen az alapmagok ganglionsejtjeiben, az ammóniumszarvban, a medulla oblongatában és még az agykéregben is. Amikor a májsejtek károsodnak, az extrahepatális sárgasághoz hepatikus sárgaság kerül. A gyermekek a nukleáris sárgaság súlyos tüneteivel halnak meg. Ha túlélik, a vereség tünetei megmaradnak idegrendszer(az extrapiramidális rendszer zavarai koreoathetosisos mozgásokkal, egyfajta táncos járás, kényszerített fejmozgások, néha az önkéntes mozgások koordinációjának zavara gyakori esésekkel, fokozott izomtónus, mentális retardáció, vagyis az úgynevezett encephalopathia jeleivel posticteria infantum).

Coombs-teszt

A Direct Coombs-teszt egy antiglobulin-teszt (agglutináció gélben, lehetővé teszi a teljes kétértékű antitestek kimutatását), amellyel meghatározzuk az IgG antitesteket és a komplement C3 komponensét az eritrociták felületén. Jellemzően a közvetlen Coombs-teszt által kimutatott antitestek tág specifitással rendelkeznek, amely nem kapcsolódik jól megalapozott antigénhez. A pozitív közvetlen Coombs-teszt egyértelműen jelzi a hemolitikus vérszegénység jelenlétét egy páciensben, bár nem minden pozitív közvetlen antiglobulin-teszttel rendelkező beteg szenved ebben a betegségben. A betegek körülbelül 10% -ában az eritrocita membránon lévő antitestek vagy komplementkomponensek nem detektálhatók közvetlen Coombs-teszttel (teszt negatív), ennek ellenére autoimmun hemolitikus vérszegénységben szenvednek. Az antitestek specifitásának tisztázása érdekében ilyen esetekben teszteket alkalmazunk az eluálásukkal. A közvetlen, csak komplement szempontjából pozitív Coombs-teszt általában a hideg IgM antitestekkel függ össze. Ebben az esetben az bazális testhőmérsékleten az IgM antitestek nincsenek jelen az eritrocitákon. Mivel azonban az IgM antitestek aktívan rögzítik a komplementet, és a komplement a vörösvértesteken marad, az autoimmun hemolitikus vérszegénység (hideg aggutinin-betegség) ezen formájával a Coombs-teszt csak a komplementre lesz pozitív.

A közvetlen Coombs-teszt pozitív a meleg antitestek által okozott autoimmun hemolitikus vérszegénység, autoimmun gyógyszer vérszegénység (metildopa szedésekor a betegek legfeljebb 20% -ának van pozitív reakciója), gyógyszeradszorpciós típusú hemolitikus anaemia, immunokomplex típusú hemolitikus anaemia (teszt pozitív csak a C3 aránynál) hideg antitestek által okozott autoimmun hemolitikus vérszegénység - hideg agglutinin betegség (a teszt csak a C3 esetében pozitív). Paroxizmális hideg hemoglobinuria esetén a közvetlen Coombs-teszt negatív.
A betegség akut periódusában az eritrociták pusztulása miatt, amelyeken nagyszámú antitestet rögzítettek, hemolitikus krízissel, valamint a betegség krónikus lefolyása során nem kielégítő mennyiségű antitesttel, negatív közvetlen Coombs-teszt figyelhető meg.

:

A minőségbiztosítás fontos feltétele laboratóriumi kutatás a vérmintát éhgyomorra, reggel (12:00 előtt) veszik.
12 órával a vizsgálat előtt ki kell zárni az alkoholt, a dohányzást, az ételbevitelt, és korlátozni kell a fizikai aktivitást.
A vérvétel napján reggel ihat vizet.
Kizárja a gyógyszerek szedését; ha nem lehet törölni a gyógyszert, erről tájékoztatnia kell a laboratóriumot.
Bármely orvosi diagnosztikai eljárás elvégzése előtt célszerű az anyagot elvinni.
A nők hormonszintjének felmérésekor fontos figyelembe venni a menstruációs ciklus napját, amikor a legoptimálisabb meghatározni egyes hormonokat. Ezt az információt orvosától kaphatja meg.

Indikátor	Jellegzetes
Elemző és vizsgálati rendszer	Gélkártyák; DiaMed AG (Svájc)
Referenciaértékek	Negatív eredmény / pozitív eredmény
Zavaró tényezők. Gyógyszer
Pozitív teszt lehetséges a következő gyógyszerek szedésekor: acetaminofen, szalicilsav, aminopirin, antihisztaminok, karbromal, cefalosporinok, klórpromazin, klórpropamid, ciszplatin, klonidin, dipiron, etosuximid, fenfluramin, fuadin, hidralazin, hidroklorotiazid, ibuprofen, inzulin, izoniazid, levodopa, mefenil-savas, metil-probenidin, fenil-kinidin, fenilidin-fenidin, fenacetin rifampin, sztreptomicin, szulfonamidok, szulfonilkarbamid-származékok, tetraciklin, triamterén, trimellit-anhidrid
Jelölések a kinevezéshez
Immun hemolitikus vérszegénység, újszülöttek hemolitikus betegségének, gyógyszeres immun hemolitikus vérszegénység, hemolitikus transzfúziós reakciók diagnosztizálása
Az eredmények értelmezése
A normál közvetlen Coombs-teszt negatív. Pozitív Coombs-teszt: autoimmun hemolitikus anaemia; az újszülött hemolitikus betegsége; gyógyászati immunhemolitikus vérszegénység; hemolitikus transzfúziós reakciók

Agglutinációs teszt anti-rhesus antitestek meghatározására (közvetett Coombs-reakció)alkalmaz intravaszkuláris hemolízissel rendelkező betegeknél. Ezen betegek némelyikében hiányos, egyértékű antiréz antitestek találhatók. Kifejezetten kölcsönhatásba lépnek az Rh-pozitív vörösvértestekkel, de nem okoznak agglutinációt. Az ilyen hiányos antitestek jelenlétét közvetett Coombs-teszt határozza meg. Ehhez antiglobulin szérumot (humán immunglobulinok elleni antitestek) adnak az anti-rhesus antitestek + Rh-pozitív vörösvértestek rendszeréhez, ami az eritrociták agglutinációját okozza. A Coombs-reakció segítségével diagnosztizálják az immun eredetű vörösvértestek intravaszkuláris lízisével járó kóros állapotokat, például újszülöttek hemolitikus betegségét: az Rh-pozitív magzat vörösvértestjei kombinálódnak a vérben keringő Rh-faktor hiányos antitestjeivel , amelyek Rh-negatív anyától keresztezték a placentát.

Gépezet... A hiányos (egyértékű) antitestek kimutatásának nehézségei abból adódnak, hogy ezek az antitestek, amelyek egy adott antigén epitópjaihoz kötődnek, nem alkotnak rácsszerkezetet, és az antigének és az antitestek közötti reakciót agglutináció, kicsapódás vagy egyéb módon nem észlelik. tesztek. A képződött antigén-antitest komplexek azonosításához további vizsgálati rendszereket kell használni. A terhes nő vérszérumában található hiányos antitestek kimutatására, például az eritrociták Rh antigénjére, a reakciót két szakaszban hajtják végre: 1) a vizsgálati szérum kétszeres hígításához Rh antigént tartalmazó vörösvérsejteket adnak és egy órán át 37 ° C-on tartjuk; 2) nyúl anti-humán anti-globulin szérumot (előzőleg titrált munkahígításban) adunk az első lépést követően alaposan megmosott vörösvértestekhez. 30 percig 37 ° C-on végzett inkubálás után az eredményeket hemagglutináció jelenlétével (pozitív reakció) értékeljük. Szükséges a reakció összetevőinek ellenőrzése: 1) antiglobulin szérum + nyilvánvalóan érzékenyített vörösvértestek specifikus antitestekkel; 2) normál szérummal kezelt vörösvértestek + antiglobulin szérum; 3) Rh-negatív eritrociták, amelyeket a vizsgált szérummal + antiglobulin szérummal kezeltek.

50. Passzív hemagglutináció reakciója. Gépezet. Alkatrészek. Alkalmazás.

Közvetett (passzív) hemagglutinációs reakció(RNGA, RPGA) eritrociták (vagy latex) felhasználásán alapszik, amelyek antigénjeivel vagy antitestjeikkel a felületükön adszorbeálódtak, és amelyeknek a kölcsönhatása a betegek vérszérumának megfelelő antitestjeivel vagy antigénjeivel az erythrocyták összeragad, és kiesik a kémcső vagy sejt fésült üledék formájában.

Alkatrészek. Az RNGA előállításához egy kos, ló, nyúl, csirke, egér, ember és mások vörösvértestjei használhatók, amelyeket későbbi felhasználásra betakarítunk, formalinnal vagy glutáraldehiddel kezelünk. Az eritrociták adszorpciós kapacitása megnő, ha tannin vagy króm-klorid oldataival kezelik őket.

Az RNGA antigénjei lehetnek mikroorganizmusok poliszacharid antigénjei, bakteriális vakcinák kivonatai, vírusok és rickettsiák antigénjei, valamint egyéb anyagok.

A magas vérnyomás által érzékenyített eritrocitákat eritrocita diagnosztikának nevezzük. Az eritrocita diagnosticum előállításához leggyakrabban a ram eritrocitákat használják, amelyek nagy adszorbeáló aktivitással bírnak.

Alkalmazás... Az RNGA-t fertőző betegségek diagnosztizálására, a gonadotrop hormon meghatározására használják a vizeletben, amikor a terhesség létrejött, a gyógyszerekkel, hormonokkal szembeni túlérzékenység kimutatására és néhány más esetben.

Gépezet... A közvetett hemagglutinációs teszt (RNGA) érzékenysége és specificitása lényegesen magasabb, mint az agglutinációs teszté. A kórokozó antigénszerkezete alapján történő azonosítására vagy a vizsgált kóros anyagban található baktériumtermékek - toxinok megjelölésére és azonosítására szolgál. Ennek megfelelően szokásos (kereskedelmi) vörösvértest-antitest-diagnosztikát alkalmaznak, amelyet specifikus antitestek adszorpciójával állítanak elő a cserzett (tanninnal kezelt) vörösvértestek felületén. A vizsgálati anyag sorozatos hígításait műanyag lemezek lyukaiban készítjük el. Ezután ugyanolyan térfogatú, antitesttel töltött eritrociták 3% -os szuszpenzióját adjuk minden egyes lyukhoz. Szükség esetén a reakciót többféle lyukban párhuzamosan helyezzük, különféle csoportspecifikus antitestekkel töltött eritrocitákkal.

2 órán át 37 ° C-on végzett inkubálás után vegye figyelembe az eredményeket, értékelve megjelenés vörösvértestek üledéke (rázás nélkül): negatív reakcióval az üledék kompakt korong vagy gyűrű formájában jelenik meg a kút alján, pozitív reakcióval az eritrociták jellegzetes csipkés üledéke, vékony film, egyenetlen élekkel .

Normális esetben a vörösvértestek elleni antitestek nincsenek a vérben.

A Direct Coombs-teszt egy antiglobulin-teszt (agglutináció gélben, lehetővé teszi a teljes kétértékű antitestek kimutatását), amellyel meghatározzuk az IgG antitesteket és a komplement C3 komponensét az eritrociták felületén. Jellemzően a közvetlen Coombs-teszt által kimutatott antitestek tág specifitással rendelkeznek, amely nem kapcsolódik jól megalapozott antigénhez. A pozitív közvetlen Coombs-teszt egyértelműen jelzi a hemolitikus vérszegénység jelenlétét egy páciensben, bár nem minden pozitív közvetlen antiglobulin-teszttel rendelkező beteg szenved ebben a betegségben. A betegek körülbelül 10% -ában az eritrocita membránon lévő antitestek vagy komplementkomponensek nem detektálhatók közvetlen Coombs-teszttel (teszt negatív), de ennek ellenére autoimmun hemolitikus vérszegénységben szenvednek. Az antitestek specifitásának tisztázása érdekében ilyen esetekben teszteket alkalmazunk az eluálásukkal. A közvetlen, csak komplement szempontjából pozitív Coombs-teszt általában a hideg IgM antitestekkel függ össze. Ebben az esetben az bazális testhőmérsékleten az IgM antitestek nincsenek jelen az eritrocitákon. Mivel azonban az IgM antitestek aktívan rögzítik a komplementet, és a komplement a vörösvértesteken marad, az autoimmun hemolitikus vérszegénység (hideg aggutinin-betegség) ezen formájával a Coombs-teszt csak a komplementre lesz pozitív.

Indirekt Coombs-teszt - egy közvetett antiglobulin-teszt (hiányos antitesteket észlel) a vérben lévő atipikus antitesteket, ideértve az alloantitesteket is, az eritrociták idegen antigénjeivel szemben. Nevét (közvetetten) annak köszönheti, hogy 2 szakaszban halad. Kezdetben a beteg hiányos antitesteket tartalmazó vérszéruma látható megnyilvánulások nélkül kölcsönhatásba lép a hozzáadott corpuscularis Ag-diagnosticummal. A második szakaszban a hozzáadott antiglobulin szérum kölcsönhatásba lép az antigéneken adszorbeált hiányos antitestekkel, látható csapadék megjelenésével. A homológ (allogén) eritrocita transzfúzió vagy terhesség a legtöbb gyakori okok ezen anti-eritrocita antitestek képződése. A pozitív közvetett Coombs-teszt és a negatív közvetlen teszt kombinációja semmit sem tesz az autoimmun hemolitikus vérszegénység diagnosztizálásához. A pozitív közvetett Coombs-teszt bizonyos nehézségeket okoz a vér transzfúzióhoz történő kiválasztásában és a tartósított vérrel való kompatibilitás keresztvizsgálatában, de nincs egyéb diagnosztikai értéke.

A hiányos eritrocitaellenes antitestek kimutatására tervezett antiglobulin-tesztet Coombs (Morant, Reis) javasolta 1945-ben, és később megkapta a Coombs-teszt nevet. A lényeg ez a módszer abban rejlik, hogy a humán immunglobulinok ellen antitesteket tartalmazó antiglobulin szérum a hiányos antitestekkel szenzibilizált eritrocitákkal reagálva agglutinációhoz vezet.

Attól függően, hogy az antitestek rögzülnek-e az eritrociták felületén, vagy szabad állapotban vannak-e a vérplazmában, közvetlen vagy közvetett Coombs-tesztet alkalmaznak.

Közvetlen Coombs-tesztet végeznek olyan esetekben, amikor okkal feltételezhető, hogy a vizsgált vörösvérsejtek már vannak in vivo megfelelő antitestekkel szenzibilizálták, azaz a reakció első fázisa - az antitestek rögzítése az eritrociták felületén - a testben történt, és az ezt követő antiglobulin-szérum hozzáadása az érzékenyített sejtek agglutinációját okozza.

Közvetett Coombs-teszt alkalmazásával a tesztszérumban jelen lévő hiányos antitesteket detektálják. Ebben az esetben a reakció két szakaszban halad. Az első szakasz a teszt eritrociták inkubálása a teszt szérummal, amelynek során a teszt szérum mintában lévő antitesteket rögzítjük az eritrocita felületén. A második szakasz az antiglobulin szérum hozzáadása.

Mostanáig a Coombs-tesztet széles körben használják a laboratóriumi gyakorlatban az immunopatológiai állapotok diagnosztizálására, különösen autoimmun hemolitikus vérszegénységek esetén, amelyekre az eritrociták pusztulása jellemző a sejtmembrán antitestekhez és (vagy) a komplement rendszer komponenseihez való kötődése miatt. . Segítségével kiderül az Ig G (általában Ig G1 és Ig G3) jelenléte az eritrocita membránján, amely aktiválhatja a komplementet, és néha a komplementet (C3d). Azonban a betegség akut periódusában az eritrociták pusztulása miatt, amelyre nagyszámú antitestet rögzítettek, hemolitikus krízissel, valamint a betegség krónikus lefolyása során elégtelen mennyiségű antitesttel, negatív közvetlen Coombs-teszt figyelhető meg.

Hangsúlyozni kell, hogy a közvetett Coombs-teszt továbbra is a legjobb módszer a transzfúziós közegek egyedi kiválasztására, mivel ez lehetővé teszi a donor és a recipiens egyéni kompatibilitásának legpontosabb meghatározását az eritrocita antigének szempontjából.

Az autoantitestek jelenlétére vonatkozó közvetlen antiglobulin-teszt további elvégzése ajánlott, ha a transzplantáció előtti időszakban a szervek és szövetek összes befogadóját és a hematopoietikus őssejtek befogadóit a transzplantáció után is megvizsgáljuk.

Az immunohematológia és a transzfusiológia mellett az antiglobulin teszteket széles körben alkalmazzák számos kóros állapot diagnosztizálásában: hematológiai betegségekben, beleértve a limfoproliferatív betegségeket is, szisztémás betegségek kötőszövet, Sjogren-kór, krónikus aktív hepatitis stb.

Coombs tesztjeit az orvosi genetikában és az igazságügyi orvostudományban aktívan használják a felszíni eritrocita antigének meghatározására.

Coombs tesztje meglehetősen fáradságos kutatási módszerre utal, amelynek végrehajtása különös gondosságot igényel. Használata bizonyos nehézségekkel jár, különösen a gyengén pozitív reakciók értelmezésével. Ismeretes, hogy a hamis gyengén pozitív vagy negatív reakciók a Coombs-tesztek végrehajtása során eredményezhetik az eritrociták elégtelen hatékony mosását, az antiglobulin-reagens szérumnyomokkal való semlegesítését, valamint egy nem zsíros felülettel való érintkezést, amelyen az antiglobulin képes rögzíteni kell, ezáltal elveszíti tevékenységét. A Coombs-teszt másik hátránya az antiglobulin-reagens instabilitása, amelynek előállításának és tárolásának bizonyos jellemzői vannak, ami szintén megnehezíti az antiglobulin-szérummal végzett hemagglutinációs reakció számszerűsítését.

Ezenkívül A. Holburn, D. Voak et al. kimutatták, hogy a hamis negatív eredmények oka lehet a túlzott rázás az eritrociták szuszpenziójának szuszpenziója alatt. Az antiglobulin-tesztek során elkövetett hibás eredményeket az antiglobulin-reagensekben fellépő antikomplementer antitestek keverékének, különösen a C3d, C3c, C4c és C4d komplement komponenseknek a jelenléte is okozhatja, amelyek a teszt vörösvértestek felületén adszorbeálódnak. az inkubálás során, és pozitív eredmény megjelenését keltheti.

Ezek a hátrányok könnyen kiküszöbölhetők a vizsgálati minták alapos mosásával és a reakciókörülmények ellenőrzésével.

Az elmúlt évtizedben alacsony ionerősségű izotóniás oldatot (LISS) alkalmaztak a közvetett Coombs-teszt idejének lerövidítésére és érzékenységének növelésére.

Az antiglobulin-tesztek vitathatatlan előnye számos szerző szerint magas érzékenységük, amely jelentősen meghaladja az alternatív kutatási módszerek felbontását, amelyeket a nem glutináló antitestek kimutatására használnak.

Összehasonlítottuk a vérszérum vizsgálati módszerek felbontását hiányos antitestek jelenlétére poliglucin, zselatin és antiglobulin szérum alkalmazásával. A vizsgálat során a hiányos anti-D-antitestek titereit 140 izoimmun donor vérszérum mintájában követtük nyomon zselatin, poliglucin és indirekt antiglobulin tesztek alkalmazásával. Ezen módszerek megfogalmazását az általánosan elfogadott módszerekkel összhangban hajtották végre.

Megállapították, hogy felbontásukat tekintve az eritrociták anti-D-antitestekkel történő szenzibilizálásának detektálására szolgáló módszerek a következőképpen vannak elrendezve: a legérzékenyebb a közvetett Coombs-teszt, majd a zselatin-teszt és a legkevésbé informatív a poliglucin-teszt. Az ebben a kísérletsorozatban elért eredmények teljes mértékben összhangban vannak az irodalmi adatokkal, ami arra enged következtetni, hogy Coombs-tesztek érzékenysége meglehetősen magas, ami lehetővé teszi az anti-eritrocita jelenlétének nagyfokú megbízhatósággal történő azonosítását. olyan antitestek a szervezetben, amelyek nem okoznak vörösvértestek agglutinációját.

Mindazonáltal a Coombs-tesztek gyakorlatba állításakor vannak olyan esetek, amikor hiányos antitesteket nem detektálnak, bár a betegség klinikai képe vagy a korábbi immunizáció jelzi ezek lehetséges jelenlétét. Ilyen esetekben feltételezhető, hogy az antitestek mennyisége nem elegendő ahhoz, hogy antiglobulin szérum antitestek kicsapják őket.

Ezt a következtetést saját kísérletünk is megerősítette, amelyben a sejtek analitikai mikroelektroforézisének módszerével igazolták a teszt eritrocitákon az anti-D-antitestek jelenlétét, amelyeket a közvetett Coombs-teszt nem mutatott ki. Ebben a kísérletsorozatban antiglobulin szérumot adtak az eritrocitákhoz, amelyeket korábban az immunizált donorok véréből nyert szérummal inkubáltak a használatban lévő antitelogenezis időszakában, azaz abban az időszakban, amikor ismert módszerekkel - köztük Coombs-teszt - nem mutattak ki bennük antitesteket.

Az elvégzett vizsgálatokban statisztikailag igazolták a hiányos antitestek jelenlétét az eritrociták felületén jelentős változás az érzékenyített vörösvérsejtek elektroforetikus mobilitásának nagysága antiglobulin szérum hozzáadása után. Meg kell jegyezni, hogy ezt követően anti-D-antitesteket határoztak meg az összes immunizált donor vérszérumában a közvetett Coombs-teszt során.

Gillerand és mtsai. azt is kimutatta, hogy az antiglobulin-teszteket egy bizonyos érzékenységi küszöb jellemzi: pozitív eredményt csak akkor jegyeznek fel, ha legalább 500 Ig G molekula rögzül egy vörösvértest felületén.

Ezenkívül a szakirodalom bizonyítékot szolgáltat arra vonatkozóan, hogy a Coombs-teszt lehetséges negatív eredménye összefüggésben állhat az eritrocitákat szenzibilizáló antitestek alacsony affinitásával, aminek eredményeként a mosási folyamat során könnyen eluálódnak a vörösvérsejtek felületéről.

A fentiek figyelembevételével arra lehet következtetni, hogy egyes esetekben a Coombs-teszt negatív eredménye még nem bizonyítja az eritrociták felületén rögzített antitestek hiányát.

Ismeretes, hogy Coombs reakciói nagyon specifikusak és képesek kimutatni a hiányos antitestek legtöbb típusát. Néhány kísérleti adat azonban azt mutatja, hogy az antiglobulin-tesztek pozitívak lehetnek nem immunológiai körülmények között. E. Muirhead és mtsai. a fenilhidrazin beadását követő második napon a kutyákon pozitív Coombs-tesztet tapasztaltak. A pozitív reakció ilyen gyors megjelenése bizonyíték annak immunológiai természetével szemben, és inkább a fehérje nem specifikus adszorpciójával jár együtt az eritrociták felületén.

M. Williams és mtsai. megállapította, hogy a klavulánsav pozitív reakciót is kiválthat, amely a szerzők szerint a plazmafehérjék nem specifikus adszorpciójával jár együtt az eritrocita felületén. Hasonló hatást figyeltek meg a cefalosporin antibiotikumokkal.

A fenti vizsgálatok szerzői hangsúlyozzák a Coombs-tesztek pozitív eredményeinek nem immunológiai jellegét, és ragaszkodnak ahhoz, hogy ezek az anyagok képesek a vörösvértestek membránjainak módosulását okozni, amelynek eredményeként az eritrociták képesek fehérjéket felvenni ( különösen az albumin), amelyek általában a vérplazmában vannak jelen, és nem rendelkeznek antitest tulajdonságokkal. Ezenkívül lehetséges, hogy a xenobiotikum a sejtfelszínen adszorbeálódva összeköttetésként szolgál a sejtmembrán és a plazmafehérjék között.

Az antiglobulin tesztek eredményeinek helyes értelmezéséhez a perifériás vér fiatal és érett eritrocitáinak mennyiségi arányát is figyelembe kell venni. Megállapították, hogy a fokozott eritron-regeneráció ideje alatt a testből kiválasztott retikulociták antiglobulin-szérummal agglutinálódhatnak.

Pozitív közvetlen antiglobulin teszt, el. Különbözőekkel is megjegyzik kóros állapotok az immunrendszer rendellenességei, gyulladásos folyamatok, amelyek különböző specifitású antitestek nem specifikus adszorpciójához vezetnek az eritrociták membránjain. Ez arra utal, hogy az Ig G molekulák nem lépnek kölcsönhatásba az eritrociták specifikus antigénjeivel, hanem csak a vizsgált sejtek felületén vannak rögzítve.

Nem szabad megfeledkezni arról, hogy a Coombs-teszt felállításakor olyan betegségek esetén, amelyeket a dysproteinemia kialakulása vagy a paraproteinek megjelenése jellemez, a pozitív eredmény annak köszönhető, hogy az eritrociták felületén olyan fehérjék vannak jelen, amelyek nem rendelkeznek tulajdonságokkal antitestek mennyiségét, ami szintén jelzi az antiglobulin minták elégtelen specifitását a segítségükkel kimutatott fehérje jellege szempontjából.

Tehát, amint számos tanulmány kimutatta, a közvetlen és közvetett antiglobulin-tesztek pozitív eredményei nem feltétlenül bizonyítják az antitestek jelenlétét, mivel pozitív reakciók figyelhetők meg különböző kóros állapotokban, amelyek nem társulnak a test izoszenzitizálásával vagy autoszenzitizációjával. Ezért csak több immunoserológiai módszer eredményeinek összehasonlítása a klinikai kép betegség lehetővé teszi a fejlődő kóros folyamat teljes megítélését.

A pozitív, közvetett antiglobulin-teszt negatív közvetlen teszttel általában azt jelzi, hogy a vizsgált szérumban szabad alloantitestek vannak, amelyek korábbi vérátömlesztéssel vagy terhességgel társultak.

Coombs-teszt gyakran pozitív a paroxizmális éjszakai hemoglobinuria súlyosbodásával; pozitív Coombs-teszt anti-C3 és anti-C3dg-val a hideg agglutinin betegség markere.

Azokban az esetekben, amikor az újszülöttek hemolitikus betegségének kialakulásának kockázata magas, a közvetlen és közvetett antiglobulin-tesztek eredményei nagy jelentőséggel bírnak a diagnózis felállításában (leggyakrabban terhesség alatt), és ha szükséges, az antitest megjelenésének és változásának dinamikus monitorozásával. titer. Leggyakrabban az újszülöttek hemolitikus betegsége az anya és a magzat inkompatibilitásával jár együtt a D antigénnel, ritkábban az AB0 rendszer antigénjeivel, és még ritkábban más antigénekkel (C, C, K stb.). A kapott antithe la, mivel általában az Ig G-osztály hiányos antitestjei, egyértelműen kimutathatóak a közvetett antiglobulin-tesztben. Ebben a betegségben az azonosított antitestek helyes titere és specifitása nagy jelentőséggel bír, mivel bizonyos összefüggés van a terhes nő vérében az eritrocitaellenes antitestek szintje és a hemolitikus betegség súlyosságának lehetséges prognózisa között.

Az indirekt Coombs-tesztre a klinikai gyakorlatban is szükség van a biztonságos transzfúziós terápia biztosítása érdekében. Megvalósítása kötelező eleme a donorok és a befogadók különböző kategóriáinak immunohematológiai vizsgálata, valamint az orvosi és profilaktikus intézmények minden olyan betegének rutinvizsgálata, akiknél vér és komponenseinek transzfúziójára lehet szükség.

Indirekt antiglobulin tesztet alkalmaznak a következő esetekben:

Az Rh-hovatartozás (D-antigén) pontosabb meghatározásához, az Rh-faktor más módszerekkel (poliglucin, zselatin stb.) Történő meghatározásának nem egyértelmű eredményeivel;

Gyenge eritrocita antigének (Kell, Duffy, Kidd, Lewis rendszerek stb.) És ezen antigének elleni antitestek kimutatására;

Alloimmun anti-eritrocita antitestek kimutatására és azonosítására, beleértve azokat az antitesteket is, amelyek hemolitikus transzfúziós reakciókat okoznak;

Az AB0 rendszer immun antitestjeinek jelenlétének meghatározása transzfúziós hemolitikus szövődményekben;

Kompatibilitási tesztként a transzfúziós vér és összetevőinek egyedi kiválasztásában.

Így a Coombs-teszt egy fontos diagnosztikai teszt, amelyet az orvostudomány különféle területein (hematológia, szülészet, reumatológia, transzfusiológia, klinikai és laboratóriumi diagnosztika stb.) Használnak. A Coombs-teszt sajátosságainak ismerete hozzájárul a kapott eredmények megbízhatóságának növeléséhez, és hozzájárul a laboratóriumi adatok helyes értelmezéséhez.

Irodalom

1. Antitestek. Módszerek / szerk. D. Catty. - M.: Mir, 1991.

2. Bayramalibeyli I.E., Ragimov A.A., Gadzhiev A.B.... // vérszegénységek transzfúziós terápiája: tankönyv. kézikönyv az orvosok számára. - M.: Gyakorlat. medicine, 2005. - 105-106.

3. Volkova O.Ya., Fregatova L.M., Levchenko L.B.// transzfusiológia. - 2006. - 2. sz. - S. 39-62.

4. Donskov S.I.// A Rhesus-rendszer vércsoportjai: elmélet és gyakorlat. - M.: VINITI RAN, 2005. - S. 180-186, 195.

5.Immunoserológia (normatív dokumentumok) / össze. A.G. Bashlay, S.I. Donszkov. - M.: VINITI RAN, 1998.

6.A vérrendszer vizsgálata a klinikai gyakorlatban / szerk. GI. Kozinets, V.A. Makarov. - M.: Triada-X, 1997.

7. Levin V.I... Az erythrodieresis és az erythropoiesis mechanizmusához az akut posthemorrhagiás anaemia időszakában: szerző. dis. ... Cand. édesem. tudományok. - Minszk, 1968.

8. Rahimov A.A., Bayramalibeyli I.E.... // A vérszegénység diagnózisának, megelőzésének és kezelésének alapjai. - M.: GOU VUNMTs MZ RF, 2002. - S. 204-209.

9. Chumakova E.D.... // A hematológia és a transzfusiológia tényleges problémái: a Belarusz Köztársaság VI. Hematológusai és Transfusiológusainak Kongresszusának munkái, Minszk, 2007. május 24-25. / Szerk. A.I. Svirnovsky, M.P. Potapnev. - Minszk: Köztársasági Hematológiai és Transfusiológiai Tudományos és Gyakorlati Központ, 2007. - 50. o.

10. Coombs R., Mourant A., R verseny... // Lancet. - 1945. - Kt. 2. - 15. o.

11. Freedman j... J. Clin. Pathol. - 1979. - Kt. 32. - P. 1014-1018.

12. Holburn A.M... Minőség ellenőrzés. Módszerek a hematológiában / szerk. I. Cavill. - Edinburg: Churchill Livingstone, 1982. - 1. köt. 4. - P. 34-50.

13. Khan S.// CMAJ. - 2006. - Kt. 175, 8. sz. - 919. o.

14. Komatsu F. Nippon Rinsho. - 2005. - Kt. 63 (7. kiegészítés). - P. 719-721.

15. Komatsu F. Nippon Rinsho. - 2005. - Kt. 63 (7. kiegészítés). - P. 716-718.

16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F.// New Engl. J. Med. —1976. - Vol. 277. - P. 123-125.

17. Muirhead E.E., LigetekM., Brian S... J. Lab. Clin. Med. —1954. - Vol. 44. - P. 902-903.

18. Rosse W.F.// Hosp. Prac. - 1995. - N 105.

19. Voak D., Downie D., MooreB. et al. Biotests Bull. - 1986. - Kt. 1. - P. 41-52.

20. Voak D., Haigh T., Downie D. et al. Sejtmosó gépek antiglobulin vizsgálatokhoz. Másodlagos tesztelés - egy új módszer, amely egy széles körben használt gép hatékonyságát bizonyítja - a Sorvall CW1-AF2: jelentés a DHSS Műszaki Osztályának, 1991. február

21. Williams M.E., Thomas D., Harman C. P... et al. Antimikrobiális szerek és kemoterápia. —1985. - P. 125-127.

22. Zarandona J.M., Yazer M.H... // CMAJ. - 2006. - Kt. 174, 3. sz. - 305-307 o.

Orvosi hírek. - 2008. - 3. sz. - S. 33-36.

Figyelem! A cikk orvosi szakembereknek szól. A cikk vagy annak egyes részeinek újranyomtatása az interneten az eredeti forrásra mutató hiperhivatkozás nélkül a szerzői jog megsértésének minősül.

nézetek

Mentés az Odnoklassniki oldalra Mentés VKontakte