اختبار الدم المناعي مع تفسير المؤشرات. تشخيص ELISA: ما هو الجوهر ، وتعريف الأجسام المضادة ، وكيف يتم إجراؤها وفي أي أمراض تكون فعالة؟ ما هو التشخيص IF

من أجل تحديد مستوى محتوى المواد النشطة بيولوجيًا مثل المجمعات المناعية ، يلزم إجراء دراسة معملية خاصة. في حالة الاشتباه في وجود مرض دموي أو معدي أو أمراض المناعة الذاتية ، يصف المتخصصون اختبار الدم لـ ELISA. في سياق المقال ، سننظر في ماهيته ، وكيفية التحضير له ، وما يعرضه وكيفية فكه بنفسك.

أي نوع من الدراسة هذه - فحص دم لـ ELISA؟ يشير الاختصار إلى المقايسة المناعية للإنزيم ، والتي تحدد المحتوى الكمي والنوعي لمختلف المواد النشطة بيولوجيًا ، وكذلك الأجسام المضادة ومولدات المضادات في المواد البيولوجية.

ما يستخدم في الإنزيم المناعي:

• السائل النخاعي;
• مخاط مجرى البول ، قناة عنق الرحم.
• السائل الذي يحيط بالجنين؛
• محتويات الجسم الزجاجي.

يوصف الإنزيم المناعي لتشخيص الأمراض المنقولة جنسياً والعمليات المعدية والأورام ، ردود الفعل التحسسية، اضطرابات في عمل الغدد الصماء والجهاز التناسلي ، وأمراض المناعة الذاتية ونقص المناعة ، وكذلك لتقييم مخاطر الإصابة ببعض الكلى.

يوصف اختبار الدم لـ ELISA أثناء الحمل لغرض الكشف المبكر ، واضطرابات النمو في المراحل الأولية والتحكم في دينامياتها. بالإضافة إلى ذلك ، يسمح لك تحليل ELISA بالتحكم في مستوى الأجسام المضادة التي يمكن أن تثير تطور اضطرابات عصبية شديدة لدى الطفل ، وبالتالي منع تطور المضاعفات ليس فقط أثناء الحمل ، ولكن أيضًا أثناء الولادة.

يجعل من الممكن الاستجابة مقدمًا للمشكلات المحددة وتحسين صحة الأم نفسها وطفلها بشكل ملحوظ.

تشمل فوائد ELISA في الدم ما يلي:

• درجة حساسية عالية (تصل إلى 90٪) ؛
• إمكانية التشخيص المبكر ، مع تحديد مرحلة المرض في وقت واحد ؛
• التكلفة المنخفضة للكواشف ، وبالتالي توافرها ؛
• الحد الأدنى من المواد للبحث ؛
• الحد الأدنى من شروط الاستلام ؛
• إمكانية تخزين الكواشف على المدى الطويل ؛
• القدرة على التحكم في ديناميات تطور العملية المرضية.

أنظمة الاختبار

سلبيات المقايسة المناعية للإنزيم:

• من المستحيل تحديد العامل المسبب للمرض ، في المختبر لا يتلقون سوى استجابة مناعية له
• إمكانية الحصول على نتيجة خاطئة (في حالات نادرة جدًا ، خاصة خلال فترة الحمل).

تمرين

يعتمد مبدأ هذا النوع من اختبارات الدم على تكوين أجسام مضادة محددة في جسم الإنسان عند دخول المستضدات إليه ، أي العوامل الأجنبية ، تسبب التنميةمرض أو آخر. نتيجة لتفاعلهم ، يتم تكوين مجمعات "مستضد - جسم مضاد" ، والتي تخضع للبحث في تنفيذ المقايسة المناعية الإنزيمية.

في هذا الصدد ، من أجل عدم التأثير على هذه المجمعات ، وبالتالي ، موثوقية النتائج التي تم الحصول عليها ، يتطلب فحص الدم والمواد البيولوجية الأخرى لـ ELISA بعض التحضير.

أيضًا ، قبل 14 يومًا من الفحص المقترح ، يتم تعليق العلاج المحدد واستخدام مضادات البكتيريا والفيروسات الأدويةتوقف.

يؤخذ الدم من أجل ELISA من الوريد. مباشرة قبل أخذ عينات الدم ، حد تمرين جسديوتجنب التدخين وشرب الكحوليات.

هناك عدة تقنيات وطرق لإجراء المقايسة المناعية للإنزيم: الطريقة المباشرة وغير المباشرة ، الطريقة التنافسية وطريقة الحجب.

أساس فحص الدم (أي مادة بيولوجية أخرى) على ELISA هو خوارزمية تتكون من تنفيذ تفاعلين - مناعي وأنزيمي.

خلال الأول ، ترتبط العوامل المرضية بالعناصر الواقية لخلايا المادة البيولوجية المأخوذة للدراسة. يتم تكوين مركب مناعي مضاد للأجسام المضادة. تبدو هكذا. توجد المستضدات على سطح جميع الخلايا تمامًا.

عندما تدخل الخلايا الأجنبية الجسم ، يتم التقاطها بواسطة الخلايا المناعية (التي توجد الأجسام المضادة على أسطحها) ، والتي تقارن بيانات المستضد من سطح الخلايا الوافدة حديثًا بالمعلومات المخزنة في "ذاكرتها". في حالة وجود تناقض بين هذه البيانات ، يتم تضمين الوظائف الوقائية للجسم ، والتي تتكون في تكوين مركب مناعي.

بعد ذلك ، يتم إجراء تفاعل إنزيمي يصور نتائج التفاعل السابق. يعتمد مبدأها على تحويل المادة من واحدة إلى أخرى. لكل نوع من أنواع ELISA التي تتشكل أثناء التفاعل المناعي للمادة ، يوجد إنزيم معين ، يتم استخدام معالجته لتحديد تركيز عامل غريب (حسب كثافة تلطيخ المحلول).

فك التشفير

بفضل فحص الدم لـ ELISA ، يحدد مساعدو المختبر A و G و M. نتيجة إيجابية في دراسة الدم (المواد الخام البيولوجية الأخرى) لـ ELISA تجعل من الممكن ليس فقط إجراء التشخيص ، ولكن أيضًا مرحلة المرض وكذلك طبيعة مساره (الحاد أو المزمن).

تتشكل هذه الغلوبولين المناعي في وجود عملية مرضية في جسم المريض في فترات مختلفة من المرض:

• الغلوبولين المناعي M ، IgM- تتشكل بعد خمسة أيام من ظهور المرض وتبقى في الدم لمدة 1.5 شهر وبعدها تختفي. يشير اكتشاف IgM إلى وجود عملية مرضية أولية حادة في الجسم والحاجة إلى تدخل علاجي معزز.
• الغلوبولين المناعي G ، IgG- تحدث بعد أربعة أسابيع من الإصابة ويمكن الكشف عن وجودها في الجسم لعدة أشهر. يشير الكشف عن IgG إلى وجود مرض سابق لدى الشخص في سوابق المريض. قد تشير الزيادة في محتواها أيضًا إلى إعادة الإصابة.
• الغلوبولين المناعي A، IgA- تظهر وقت الإصابة وتبقى في الجسم لمدة أربعة أسابيع. يشير الانخفاض في محتواها إلى بداية التعافي. يشير الظهور في التحليلات مرة أخرى بعد خضوع الشخص لدورة العلاج والتعافي إلى انتقال المرض إلى شكل مزمن. يشير الكشف المتزامن لـ IgA و IgG في نتائج ELISA أيضًا إلى وجود عملية مزمنة في الجسم.

وتجدر الإشارة أيضًا إلى أن التواجد المتزامن لـ IgG و IgM في التحليلات يشير إلى أن العملية المزمنة قد ساءت وأن المريض يحتاج إلى بدء العلاج. إذا لم يتم الكشف عن أي من الغلوبولين المناعي أثناء الفحص ، فهذا يعني عدم وجود استجابة مناعية.

يتيح لك تمثيل نوع حديث من الأبحاث المختبرية ، ELISA ، أو المقايسة المناعية الإنزيمية ، العثور على أجسام مضادة أو مستضدات معينة في الدم لأمراض معينة. يتيح لك ذلك اكتشاف كل من مسببات المرض وتحديد مرحلته. في الوقت نفسه ، يمكن إصدار نتائج هذا النوع من البحث كماً ونوعاً. لذلك ، دعونا نفكر بالتفصيل في مبدأ طريقة المقايسة المناعية للإنزيم ومنهجيتها وجوهرها.

ما هو الانزيم المناعي

تم تعيينه لإجراء التقييم الشامل الأكثر شمولاً للحالة الصحية ، يسمح لك المقايسة المناعية للإنزيم بتقييم الحالة العامة للصحة وتقييم وظائفها الوقائية. تسمح لك هذه الدراسة المختبرية بتشخيص الأمراض المعدية ، وأمراض المناعة الذاتية ، وأمراض الدم في فحص الدم.

تمت مناقشة جوهر المقايسة المناعية للإنزيم في الفيديو أدناه:

لمن تم تعيينه

يمكن تخصيص هذه الدراسة للمرضى المصابين بالأمراض التالية:

• أمراض من أصل فيروسي ، بما في ذلك التهاب الكبد.
• الأمراض المنقولة جنسيا - الكلاميديا ​​، المشعرات ، الزهري ، اليوريا ، الميكوبلازما.
• نقص المناعة.
• الفحص الشامل قبل الجراحة.

يوصف أيضًا اختبار الدم ELISA لتحديد مستوى الهرمونات وتقييم جودة نوع العلاج الذي يتم إجراؤه.

قد يصف الطبيب هذا التحليل لتحديد مرحلة المرض الموجود ، مما يسمح بإجراء تعديلات في الوقت المناسب على العلاج المستخدم. وتتيح لك الدقة العالية للبيانات التي تم الحصول عليها الحصول على الصورة الأكثر تفصيلاً للصحة. في الوقت نفسه ، يتم الحصول على البيانات بعد إجراء الدراسة في فترة زمنية قصيرة جدًا ، مما يجعل من الممكن تتبع ديناميكيات تطور العملية المرضية.

لماذا إجراء هذه الاختبارات؟

نظرًا لأنه بفضل اختبار الدم ELISA ، يمكنك الحصول على قدر كبير من المعلومات حول الحالة الصحية والعمليات المرضية التي تحدث في الجسم ، وهو ما يجعل من الممكن مراعاة البيانات الأولية بشكل كامل (الصحة العامة ، المرحلة المرض ، ديناميات تطور العملية المرضية ، مؤشر على فعالية العلاج المستخدم) عند تجميع نظم العلاج.

لهذا السبب ، من أجل الحصول على النتيجة الأكثر وضوحًا للعلاج وأسرع إنهاء للعملية المرضية في الجسم ، يتم وصف اختبار الدم ELISA. يمكن علاج الأمراض الخطيرة للجهاز المناعي ، ووجود المستضدات في الدم وأسباب الحساسية ، بناءً على البيانات التي تم الحصول عليها ، بشكل أسرع باستخدام أكثر الطرق فعالية.

يتم إجراء تحليل ELISA لمجموعة متنوعة من الأمراض ، ويجب أن يتم ذلك فقط وفقًا لتوجيهات الطبيب. يتم تحديد وتيرة التحليل أيضًا من قبل الطبيب ، وعند التبرع بالدم لتحليل ELISA ، تكون صورة المرض هي الأكثر اكتمالاً. نظرًا لأنه من الممكن الحصول على ديناميكيات مسار المرض من خلال إجراء هذا التحليل أكثر من مرة ، يمكن في أغلب الأحيان وصف التبرعات بالدم من ثلاث إلى خمس مرات. هذا يجعل من الممكن مقارنة كمية الأجسام المضادة في الدم على فترات زمنية مختلفة.

أنواع مثل هذا الإجراء

هناك عدة أنواع من الإنزيم المناعي. وهي تختلف في نوع السائل المأخوذ من جسم الإنسان ، والذي على أساسه يتم دراسة تكوينه ووجود مستضدات معينة.

في الوقت نفسه ، لا يمكن أخذ دم الإنسان فحسب ، بل أيضًا سوائل أخرى لتحليلها:

• السائل الذي يحيط بالجنين،
• السائل النخاعي،
• محتويات الجسم الزجاجي
• مسحات
• مخاط من مجرى البول وقناة عنق الرحم.

تعتبر العملية نفسها لأخذ نوع معين من السوائل قياسية ويتم إجراؤها في مستشفى نهاري.

مؤشرات لعقد

عادة ، يتم وصف تحليل ELISA من قبل الطبيب إذا كان من الضروري الحصول على صورة مفصلة للمرض الحالي ، والذي يحدث في أي شكل: مزمن ، بطيء أو حاد. ويمكن اعتبار الشروط والأهداف العلاجية التالية مؤشرات لهذا النوع من التحليل:

• البحث عن مستضدات أمراض معينة ؛
• تحديد الحالة الهرمونية.
• الكشف عن فيروس التهاب الكبد في الجسم.
• البحث عن؛
• البحث عن الأجسام المضادة لأي نوع من الأمراض المعدية ؛
• فحص لوجود آفات المناعة الذاتية في الجسم.

للمقايسة المناعية للإنزيم ، انظر الفيديو أدناه:

موانع

لم يتم تحديد موانع الاستعمال للمقايسة المناعية للإنزيم حتى الآن.

أثناء الحمل ، عندما يكون هناك تغيير مستمر في محتوى الهرمونات في الدم ، من الضروري إجراء هذا التحليل بشكل متكرر لتأكيد النتيجة. قد يكون لدى حديثي الولادة والرضع أيضًا بيانات اختبار غير صحيحة: أثناء نمو الجنين ، يمكن أن تدخل أنواع معينة من الأجسام المضادة دم الجنين عبر مشيمة الأم. لذلك ، لا ينبغي اعتبار وجودهم في التحليل الذي تم إجراؤه علامة على وجود عدوى.

اختبر السلامة

إن إجراء عملية أخذ أي نوع من السوائل من جسم الإنسان لا يسبب أي آثار سلبية على الجسم. العقم الكامل أثناء التلاعب يجنب احتمال الإصابة بأي نوع من الأمراض.

التحضير لهذا الحدث

للحصول على أكثر نتائج الدراسة موثوقية ، يجب الامتناع عن شرب المشروبات الكحولية والمخدرات قبل أخذ الدم (أو أي سائل آخر) لتحليله.

كيف يتم الإجراء ، الأحاسيس أثناء ذلك

لإجراء اختبار ELISA ، يتم أخذ دم المريض بدقة على معدة فارغة: يجب عدم تناول الطعام بأي شكل قبل العملية بساعة على الأقل. التحليل مأخوذ من الوريد المرفقي.

يتم إبلاغ الطبيب مسبقًا بوجود أي أمراض والأدوية التي يتم تناولها ، وغالبًا ما يتم إلغاء الأدوية وقت التبرع بالدم. تتشابه المشاعر أثناء العملية مع أخذ الدم للتحليل الكيميائي الحيوي.

فك النتائج

يسمح لك تشخيص ELISA بتحديد وجود العدوى في الجسم ، ونشاط العملية المرضية ومسببات العدوى الموجودة. يعد الاستلام السريع لنتيجة التحليل (خلال يوم واحد) أحد مزايا هذا النوع من الدراسة.

يتم تنفيذ عملية فك تشفير المعلومات الواردة من قبل الطبيب. في الوقت نفسه ، يجب أن يؤخذ في الاعتبار أن صحة النتائج التي تم الحصول عليها لديناميات أي عمليات مضمونة عند اجتياز التحليلات في مختبر واحد.

متوسط ​​تكلفة الإجراء

يعتمد متوسط ​​سعر دراسة ELISA على اتجاه التحليل وتحديد القيم المحددة. وبالتالي ، تحديد العلامات المصلية أمراض معديةالأنواع المختلفة (anti-HAV IgG ، anti-HAV IgM ، HBsAg) ستتكلف من 200 إلى 320 روبل ويتم تنفيذها في غضون يومي عمل. يعتبر مؤشر تكلفة هذا الإجراء أيضًا ميزته: يتيح توافر الأسعار لأي نوع من البحث إجراء البحث بأي ميزانية.

تعتمد تكلفة دراسة ELISA على السياسة مؤسسة طبيةومع ذلك ، ينبغي اعتباره إجراءً عامًا يسمح لك بالحصول على صورة مفصلة للمرض الموجود وتقديم العلاج الأكثر اكتمالاً.

حول معايير وميزات دراسة ELISA ، شاهد الفيديو أدناه:

لإجراء تقييم شامل لحالة الجسم (على وجه الخصوص ، وظائفه الوقائية) ، يتم وصف اختبار الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA). يتم إجراء اختبار الدم ELISA لتشخيص الأمراض المعدية ، وأمراض المناعة الذاتية ، وأمراض الدم ، ونقص المناعة الأولي والثانوي. في هذه المقالة ، نقترح النظر بمزيد من التفصيل في ماهية اختبار الدم ELISA ، وكذلك المؤشرات الموجودة لتنفيذه.

مؤشرات لتعيين فحص الدم بواسطة ELISA ومبدأ عملها

كما أشرنا بالفعل ، فإن اختبار الدم ELISA هو اختبار معمل يتم من خلاله تحديد المستضدات أو الأجسام المضادة في عينة الدم. يستخدم هذا التحليل للكشف عن مستوى الهرمونات والمركبات المناعية والغلوبولين المناعي. هناك المؤشرات التالية لتقديم تحليل ELISA:

• تشخيص الحساسية.
• تشخيص الأمراض الفيروسية المنشأ - فيروس ابشتاين بار ، الهربس ، التهاب الكبد ، الفيروس المضخم للخلايا.
• تشخيص الأمراض المنقولة جنسياً - الميكوبلازما ، اليوريا ، الزهري ، المشعرات ، الكلاميديا.
• تعريف نقص المناعة.
• تشخيص أمراض الأورام.
• تقييم فعالية العلاج.
• تحديد مستويات الهرمون.
• الفحص الشامل قبل الجراحة.

يعتمد مبدأ عمل المقايسة المناعية للإنزيم على فحص الدم لوجود الغلوبولين المناعي (الأجسام المضادة البروتينية المحددة). ينتج الجهاز المناعي الغلوبولين المناعي عندما تدخل مستضدات (كائنات دقيقة غريبة) إلى جسم الإنسان. ترتبط هذه الجزيئات المناعية بالعديد من العوامل المعدية وتبطل مفعولها. السمة المميزة المهمة التي تمتلكها الغلوبولين المناعي هي خصوصيتها. بسبب هذه الخصائص ، يمكنهم تكوين معقد مضاد لجسم مضاد عن طريق الارتباط بمولد ضد معين. أثناء اختبار الدم ELISA ، يتم تحديد هذا المركب كميًا ونوعيًا.

في هذه الدراسة ، غالبًا ما يستخدم دم الإنسان. ومع ذلك ، كمواد للتحليل ، يمكنك أن تأخذ محتويات الجسم الزجاجي ، السائل الأمنيوسي ، السائل النخاعي. عادة ما يتم أخذ عينة الدم من الوريد المرفقي للمريض. يوصى بالتبرع بالدم على معدة فارغة (يجب أن تمر 12 ساعة على الأقل منذ الوجبة الأخيرة). إذا أخذ المريض الأدويةيجب إبلاغ الطبيب ، لأن بعضها قد يؤثر على نتيجة التحليل. كما تتأثر مصداقية نتائج الاختبار بتعاطي المخدرات والكحول.

فك شفرة اختبار الدم لـ ELISA

عادة ما يشير شكل هذا التحليل إلى نتيجة سلبية (-) أو إيجابية (+) لحساب كل فئة من الغلوبولين المناعي.

نقترح النظر في تفسير فك التشفير المحتمل لاختبار الدم لـ ELISA.

• لم يتم اكتشاف IgG و IgA وكانت نتيجة IgM سلبية - الشفاء التام.
• نتيجة IgM، IgA، IgG سلبية - لا توجد مناعة ضد العدوى.
• نتيجة IgG ، IgA إيجابية وسلبية ، وكذلك نتيجة IgM إيجابية - وجود عدوى حادة.
• نتيجة IgG إيجابية ونتائج IgA و IgM سلبية - مناعة بعد التطعيم أو العدوى.
• النتيجة الإيجابية أو السلبية لـ IgG و IgA و IgM السلبية هي عدوى مزمنة.
• نتيجة IgG، IgM، IgA إيجابية - تفاقم الأمراض المعدية المزمنة.

في المقايسة المناعية للإنزيم ، بالإضافة إلى توضيح فئات الأجسام المضادة ، يشار إلى مؤشراتها الكمية في النص. ومع ذلك ، فإن الطبيب المعالج فقط هو الذي يقدم شرحًا شاملاً لها.

مزايا وعيوب هذه الدراسة

• تكلفة منخفضة نسبيًا.
• سهولة الاستعمال.
• امكانية التشخيص مرحلة مبكرةمرض مشتبه به.
• دقة عالية نسبيًا في البيانات التي تم الحصول عليها.
• فترة زمنية قصيرة مطلوبة للحصول على نتيجة الدراسة.
• القدرة على تتبع ديناميات التنمية عملية معديةفي الكائن الحي.
• مستوى عالٍ من التوحيد ، مما يجعل من الممكن إجراء المسوحات الجماعية.
• أتمتة جميع مراحل البحث.

عيب اختبار ELISA في الدم هو أنه يمكن ، في حالات نادرة ، إعطاء نتائج إيجابية كاذبة أو سلبية خاطئة. أيضًا ، أثناء الدراسة ، بالإضافة إلى الأخطاء الفنية ، يمكن أن يكون سبب النتائج الخاطئة لدى المريض هو عامل الروماتويد ، ووجود أمراض مزمنة (يتم فيها إنتاج الأجسام المضادة) ، وتناول بعض الأدوية ، واضطرابات التمثيل الغذائي.

• داء الجيارديات.
• داء الصفر.
• داء الكيسات المذنبة.
• داء الأميبات.
• داء المشعرات - يتم إجراء الدراسة أكثر من مرة ، بعد 4-12 أسبوعًا من الإصابة ، يتم تحديد الحد الأقصى لمستوى الأجسام المضادة.
• داء التين.
• داء الفتق - إجراء التشخيص التفريقي بين الحادة و شكل مزمنمرض.
• داء المقوسات.
• داء المتورقات - في المرحلة الحادة من المرض ، يتم تحديد وجود الأجسام المضادة.
• داء الليشمانيات الجلدي أو الحشوي.

لذلك ، يمكننا تلخيص: من الضروري اجتياز اختبار ELISA للطفيليات لاكتشاف المستضدات (نفايات الطفيليات ووجودها) ، وكذلك الأجسام المضادة (الغلوبولين المناعي). النوعية هذه الطريقةنسبة البحث في تحديد الطفيليات بالإحصاء حوالي 90٪. بفضل هذا التحليل ، يمكن للطبيب تحديد نوع الطفيليات بدقة وعددها الإجمالي وكذلك تتبع ديناميكيات التطور. العمليات المرضيةبفضل مستوى الأجسام المضادة.

في أغلب الأحيان في الممارسة العملية ، يتم استخدام ثلاثة أنواع من المقايسة المناعية في المرحلة الصلبة - المقايسة المناعية غير المباشرة والمقايسة المناعية المباشرة والمقايسة المناعية من نوع السندويتش. الاختلافات بين هذه الأنواع من المقايسات المناعية هي كما يلي. في النسخة غير المباشرة للمقايسة المناعية ، يُمتص المستضد على سطح آبار صفيحة البوليسترين في المرحلة الأولى. بعد إزالة جزيئات المستضد غير المرتبطة ، تتم إضافة عينة تحتوي على أجسام مضادة خاصة بذلك المستضد. تم الكشف عن معقدات الجسم المضاد-المستضد الناتجة باستخدام أجسام مضادة للأنواع مترافقة مع ملصق (الشكل 1 أ). في النسخة المباشرة للمقايسة المناعية ، يتم الكشف عن المستضد الممتز مباشرة بمساعدة أجسام مضادة محددة مقترنة بالملصق (الشكل 1 ب). في اختبار مناعي من نوع شطيرة ، في المرحلة الأولى ، لا يتم امتصاص المستضد على سطح اللوحة ، ولكن الأجسام المضادة الخاصة بالمستضد قيد الدراسة (الأجسام المضادة للركيزة). بعد إزالة جزيئات الجسم المضاد غير المرتبطة ، تتم إضافة عينة تحتوي على المستضد. لاكتشاف معقد الأجسام المضادة المكونة للركيزة - المستضد ، تتم إضافة الأجسام المضادة الثانية الخاصة بحلقة مستضد أخرى بعيدة مكانيًا ، مقترنة ببعض الملصقات (الشكل 1 ب). إن استخدام الأجسام المضادة من نوع الساندويتش الخاصة باثنين من حواتم مستضد مختلفة في اختبار مناعي يجعل من الممكن تحقيق حساسية وخصوصية عالية في تحديد المستضد حتى في مثل هذه العينات غير المتجانسة مثل بلازما الدم.

أرز. 1. مبدأ المقايسة المناعية غير المباشرة (أ) والمباشرة (ب) والمقايسة المناعية من النوع الشطري (ج)

المقايسة المناعية للإنزيم غير المباشر (ELISA غير المباشر)

تتميز طريقة المقايسة المناعية غير المباشرة بتنفيذ عملية من 3 مراحل ، في المرحلة الأولى يتم امتصاص المستضد على بلاستيك مُعد خصيصًا ، وفي المرحلة الثانية تتفاعل الأجسام المضادة المحددة مع المستضد ، وفي المرحلة الثالثة تتفاعل الأجسام المضادة المحددة مع المستضد. - يتم إدخال أجسام مضادة في النظام مترافقة مع إنزيم يحدد مؤشر التفاعل الأنزيمي. في هذه الطريقة ، يتم استخدام بيروكسيداز الفجل باعتباره الإنزيم. يتم إجراء التفاعل في أطباق خاصة بها 96 بئر.

I. امتصاص المستضد

تمتص آبار لوحة المقايسة المناعية المكونة من 96 بئرًا 0.1-0.5 ميكروغرام من المستضد لكل بئر في 100 ميكرولتر من المحلول الملحي المخزن بالفوسفات (PBS). تتم الحضانة لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة وتهتز على لوحة شاكر أفقي. يتم غسل (ضعفين) من جزيئات المستضد غير المرتبط بمحلول ملحي مخزّن بالفوسفات يحتوي على 0.1٪ توين -20 (PBST).

ثانيًا. المنع

لمنع مواقع الربط غير المحددة ، تمتلئ آبار القرص بـ PBST وتحضن لمدة 10-15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.

ثالثا. روتين أجسام مضادة معينة

يمكن إجراء الفرز في كل من الصفوف الأفقية والعمودية للكمبيوتر اللوحي. وتجدر الإشارة إلى أنه يتم إجراء سحن الأجسام المضادة إذا كان من الضروري اختيار التركيز الأمثل للأجسام المضادة أو تحديد العيار. في حالة تحديد التركيز الأمثل و / أو عيار الأجسام المضادة ، يتم استخدام التخفيف الموصى به لهذه الأجسام المضادة المحددة.

عند السحن ، يتم إدخال تخفيف جاهز للأجسام المضادة في البئر الأول من الصف - بمعدل 1-10 ميكروغرام لكل بئر ، ثم يتم إجراء التخفيف المتسلسل للأجسام المضادة في الآبار. يتم إجراء الحضانة بأجسام مضادة محددة لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة وتهتز على شاكر لوحة أفقية. يتم الغسيل بـ PBST 3 مرات.

رابعا. إضافة أجسام مضادة للأنواع مترافقة مع ملصق إنزيم

تستخدم الأجسام المضادة متعددة النسيلة المضادة للأنواع المقترنة ببيروكسيديز الفجل كأجسام مضادة كاشفية (ثانوية). في أغلب الأحيان ، يتم استخدام الأجسام المضادة للماعز أو الأرانب ، خاصة بالجزيء بأكمله أو لشظايا Fc من أجسام مضادة معينة. عادة ما تشير الشركة المصنعة إلى تركيز الأجسام المضادة للكشف عن المخفف لمحلول المخزون (على سبيل المثال ، 1: 1000). يتم إجراء الحضانة بالأجسام المضادة الثانوية لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة وتهتز على شاكر لوحة أفقية. يتم الغسيل بـ PBST 5-6 مرات.

يحفز بيروكسيداز الفجل تفاعل أكسدة الركيزة مع بيروكسيد الهيدروجين. يستخدم O-phenylenediamine (OPD) كركيزة لبيروكسيداز الفجل. نتيجة للتفاعل ، يتم تكوين منتج أكسدة OPD ملون.

محلول الركيزة: إلى 10 مل من محلول الركيزة (0.1 مولار من محلول سترات الصوديوم ، الرقم الهيدروجيني 4.5) أضف 0.01 مل من 30٪ فوق أكسيد الهيدروجين و 0.2 مل من 50x OFD (340 مجم من OFD في 10 مل) الكحول الإيثيلي؛ تخزينها في -20 درجة مئوية).

تتم الحضانة لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة وتهز على لوحة شاكر أفقي.

V. وقف التفاعل الأنزيمي

السادس. قياس الكثافة البصرية

المقايسة المناعية المباشرة للإنزيم (ELISA المباشر)

طريقة المقايسة المناعية المباشرة لها اختلافات طفيفة فقط مقارنة بطريقة المقايسة المناعية غير المباشرة. وبالتالي ، فإن الخطوتين الأولى والثانية هي نفسها في كلا نوعي التحليل. يكمن الاختلاف في حقيقة أنه في الإصدار المباشر من المرحلة الثالثة من المقايسة المناعية ، يتم استخدام أجسام مضادة محددة مقترنة بعلامة إنزيم. إذا لزم الأمر ، فمن الممكن أيضًا تنفيذ سحن أجسام مضادة محددة مقترنة بعلامة إنزيم ، على غرار ما تم وصفه سابقًا للأجسام المضادة غير المقترنة. تم حذف المرحلة الرابعة ، ويتم تنفيذ المراحل الأخرى (V-VII) بنفس الطريقة الموضحة أعلاه للمتغير غير المباشر للمقايسة المناعية.

المقايسة المناعية من نوع ساندويتش

أرز. 2. تمثيل تخطيطي للمقايسة المناعية من نوع "الساندويتش". ATp هو الجسم المضاد للركيزة ، ATd هو الجسم المضاد للكشف ، AG هو المستضد ، M هو الملصق المرتبط تساهميًا بالجسم المضاد للكشف ، P هو الركيزة التي يتم امتصاص الجسم المضاد للركيزة عليها.

في هذا المتغير من المقايسة المناعية (الشكل 2) ، يتم استخدام زوج من الأجسام المضادة الخاصة بالحلقات البعيدة مكانيًا لمولد الضد المدروس.

I. امتصاص الأجسام المضادة للركيزة

في آبار لوحة 96-بئراً للمقايسة المناعية ، تمتص الأجسام المضادة الركيزة 1-2 ميكروغرام لكل بئر في 100 ميكرولتر من محلول ملحي مخزّن بالفوسفات (PBS). تتم الحضانة لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة وتهتز على لوحة شاكر أفقي. يتم غسل (ضعفين) من جزيئات المستضد غير المرتبط بمحلول ملحي مخزّن بالفوسفات يحتوي على 0.1٪ توين -20 (PBST).

ثانيًا. المنع

لمنع مواقع الربط غير المحددة ، تملأ الآبار بـ PBST وتحضن لمدة 10-15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.

ثالثا. الحضانة مع المستضد

في آبار الجهاز اللوحي مع الأجسام المضادة التي تم امتصاصها مسبقًا تساهم بـ 50 ميكرولتر من محلول الاختبار أو التخفيفات القياسية للمستضد. يجب تحضير تخفيفات المستضد من PBST لأن Tween-20 يقلل الارتباط غير المحدد لجزيئات البروتين ببعضها البعض وبسطح اللوحة. تتم إضافة كل من محلول الاختبار والتخفيفات القياسية للمستضد في أزواج (أو 3 مكررات) ، باستخدام بئرين (ثلاثة) لكل تخفيف بروتيني. تتم الحضانة في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة مع التقليب المستمر. يتم الغسيل بمحلول PBST 3 مرات.

رابعا. الحضانة بالأجسام المضادة التي تحمل علامات الإنزيم

تتم إضافة 100 ميكرولتر من محلول أجسام مضادة محددة مقترنة بعلامة إنزيم إلى آبار الجهاز اللوحي. عادة ما يتم تحديد التركيز الأمثل للأجسام المضادة المقترنة من قبل الشركة المصنعة (عادة ما يتم استخدام تركيز 2-4 ميكروغرام / مل). يتم إجراء الحضانة بالأجسام المضادة التي تحتوي على ملصق إنزيم لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة ويتم الاهتزاز على شاكر لوح أفقي. يتم الغسيل بـ PBST 5-6 مرات.

5. إجراء تفاعل إنزيمي مصحوب بظهور منتج ملون

يضاف 100 ميكرولتر من محلول الركيزة إلى الآبار ويحضن لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة مع التحريك المستمر.

السادس. وقف التفاعل الأنزيمي

قبل قياس الكثافة الضوئية ، يتم إيقاف تفاعل اللون مع 0.5 مولار H2SO4. بعد الحضانة ، يضاف 50 ميكرولتر من محلول حامض الكبريتيك 0.5 مولار إلى الآبار باستخدام محلول OFD العامل. بعد ذلك ، يمكنك البدء على الفور في قياس الكثافة الضوئية.

السابع. قياس الكثافة البصرية

يتم قياس الكثافة الضوئية لمحلول المنتج الملون عند λ = 490 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي اللوحي.

النسخة المطبوعة

تحليل المناعة (ELISA)

تحليل أو طريقة المناعة (ELISA) - الكشف عن المستضدات باستخدام الأجسام المضادة المقابلة المرتبطة بها مع إنزيم الملصق (الفجل بيروكسيديز ، بيتا جالاكتوزيداز و أو الفوسفاتيز القلوي). بعد أن يتم دمج المستضد مع الأمصال المناعية المسمى بالإنزيم ، تتم إضافة الركيزة / الكروموجين إلى الخليط. يتم شق الركيزة بواسطة الإنزيم ويتغير لون منتج التفاعل - كثافة اللون تتناسب طرديًا مع عدد جزيئات المستضد والأجسام المضادة المرتبطة.

يتم الكشف عن المكونات عن طريق إضافة الأجسام المضادة أو المستضدات المسمى. مع نتيجة إيجابية ، يتغير لون الكروموجين.

المرحلة الصلبة المناعية غير المباشرة للإنزيم

في كل مرة بعد إضافة المكون التالي ، تتم إزالة الكواشف غير المربوطة من الآبار عن طريق الغسيل.
I. عند تحديد الأجسام المضادة ، يتم إضافة مصل دم المريض ومصل مضاد الغلوبولين المسمى بالإنزيم والركيزة / الكروموجين للإنزيم بشكل تسلسلي إلى آبار الألواح مع المستضد الممتص.

ثانيًا. عند تحديد المستضد ، يتم إدخال المستضد (على سبيل المثال ، مصل الدم مع المستضد المطلوب) في الآبار مع الأجسام المضادة الممتصة ، ويضاف المصل التشخيصي ضده والأجسام المضادة الثانوية (ضد المصل التشخيصي) المسمى بالإنزيم ، و ثم الركيزة / الكروموجين للإنزيم.

ELISA التنافسي للكشف عن الأجسام المضادة:تتنافس الأجسام المضادة ذات الأهمية والأجسام المضادة التي تحمل علامة الإنزيم مع بعضها البعض على المستضدات الممتصة على المرحلة الصلبة.

تحديد تسمية البيروكسيديز باستخدام التلألؤ الكيميائي المحسن. تطوير طرق سريعة للمقايسة المناعية للإنزيم ، والتي يتم إجراؤها باستخدام الأجهزة المحمولة. التآزر ودرجة التعزيز. شدة ومدة انبعاث الضوء.

المقايسة المناعية للإنزيم مع التلألؤ الكيميائي المعزز

المقدمة

يمكن تحديد ملصق الإنزيم كميًا بطرق مختلفة ، على سبيل المثال ، استخدام قياس الألوان وقياس التألق والقياس الإشعاعي وقياس الجهد.

في الآونة الأخيرة ، تم استخدام التلألؤ الكيميائي أو التلألؤ الحيوي لهذا الغرض. يتم عرض ملصقات الإنزيمات التي يمكن تحديدها باستخدام التفاعلات المصحوبة بانبعاث الضوء في الجدول. 1. بشكل عام ، حساسية طرق الكشف الكيميائي والبيولوجي عالية جدًا ، وإذا تم أيضًا استخدام تضخيم الإشارة من ملصق الإنزيم ، فيجب أن تكون حساسية طرق المقايسة المناعية المقابلة عالية للغاية.

تم مؤخرًا إثبات إمكانيات طريقة الإضاءة الحيوية باستخدام مثال تحديد D-galactosidase. باستخدام التفاعل المقترن من الجالاكتوز ديهيدروجينيز AOH: PMN2 أوكسيريدوكتاز البكتيرية لوسيفيراز ، 2 * 10 22 مول من / 3-galactosidase تم الكشف عنها.

يستخدم بيروكسيداز الفجل على نطاق واسع كعلامة في المقايسة المناعية للإنزيم ، وطرق الحصول على الاتحادات وتثبيتها التي تمت دراستها جيدًا.

غالبًا ما يتم تحديد بيروكسيداز الفجل بطريقة قياس الألوان ، ولكن يمكن أيضًا استخدام تفاعلات كيميائية وبيولوجية مختلفة لهذا الغرض.

تمت دراسة تحديد بيروكسيداز باستخدام تفاعل كيميائي في نظام لومينول-هيدروجين بيروكسيد المعزز بمركبات الفينول بالتفصيل.

هذا النهج لتحديد نشاط الإنزيم له عدد من المزايا بالمقارنة مع طرق أخرى لتحديد ؛ يتم سرد خصائصه الرئيسية في الجدول. 2.

مكبرات الصوت. المركبات المختلفة ، بما في ذلك 6-هيدروكسي بنزوثيازول مثل لوسيفيرين ، الفينولات ، النفثول ، والأمينات ، لديها القدرة على تعزيز انبعاث الضوء في أكسدة اللمعان المحفز بالبيروكسيديز مع بيروكسيد الهيدروجين.

على التين. يوضح الشكل 1 هياكل ممثلي المواد من كل فئة. تعتمد درجة تضخيم انبعاث الضوء على تركيز الكواشف. يظهر في الشكل 3 الاعتماد النموذجي لشدة اللمعان على تركيز المُحسِّن في تفاعل اللومينول مع بيروكسيد الهيدروجين ، المحفز بواسطة البيروكسيديز والمعزز بـ 6-هيدروكسي بنزوثيازول.

التآزر ودرجة التعزيز. في نظام بيروكسيداز - اللمعة - بيروكسيد الهيدروجين ، تأثير الأزرق-

rgism ، كما يتضح من البيانات الواردة في الجدول. 3. درجة التضخيم تتأثر بعدة عوامل. ومع ذلك ، تم تحقيق زيادة في انبعاث الضوء بأكثر من 500 مرة.

في وجود بعض المضخمات ، ينخفض ​​انبعاث ضوء الخلفية في نظام لومينول-هيدروجين بيروكسيد. عند تحديد نشاط البيروكسيداز ، فإن هذا يجعل من الممكن زيادة نسبة الإشارة إلى الضوضاء بعدة أوامر من حيث الحجم فقط من خلال استخدام هذه المضخمات.

تعزيز التلألؤ هو سمة من سمات دياسيل هيدرازيدات مختلفة ، تحت تأثير العوامل المؤكسدة في وجود البيروكسينديز. لا يتم ملاحظة التحسن في حالة بعض المواد ذات نشاط البيروكسيداز ، مثل الهيموجلوبين ، الذي يحفز التفاعلات اللونية فقط.

تشير هذه الحقيقة إلى خصوصية أعلى لمقايسة الإضاءة الكيميائية المحسّنة مقارنة بالطرق اللونية. إن أطياف الضوء المنبعث هي نفسها عمليًا في التفاعلات المحسنة وغير المعززة. هذا يشير إلى أن مكبر الصوت نفسه لا ينبعث منه ضوء.

في غياب المعززات ، يبدو أن اللمعان الكيميائي في نظام البيروكسيديز - لومينول - بيروكسيد محدود بسبب التفاعل البطيء نسبيًا للبيروكسيديز ، والذي يكون على شكل ما يسمى المركب II ، مع اللومينول ، مما يؤدي إلى تكوين اللومينول الجذور وتجديد البيروكسيداز.

يمكن للمحسنات القادرة على التفاعل بسرعة مع مثل هذا المركب أن تزيد من انبعاث الضوء من خلال تسريع تحويل المركب II إلى بيروكسيداز نشط.

يمكن بعد ذلك أن تتفاعل منتجات تحويل المُحسِّن بسرعة مع luminol لتكوين جذور لومينول إضافية وبالتالي تعزيز انبعاث الضوء. يمكن أن تعمل المعززات أيضًا على وسيطة غير نشطة من البيروكسيداز ، مثل المركب III.

الكواشف

عامل مهم في تحديد نشاط البيروكسيداز باستخدام التلألؤ الكيميائي المعزز هو النقاء الكيميائي لثنائي أيسيل هيدرازيدات الحلقية.

أظهرت دراسة عينات مختلفة من اللومينول أن الشوائب تؤثر سلبًا على انبعاث الضوء. نتيجة للعمليات الكيميائية الضوئية والحرارية ، يتحلل اللومينول جزئيًا ، وتؤثر الشوائب الناتجة على حركية انبعاث الضوء وشدة انبعاثه.

جدول يقدم الشكل 4 نتائج مقارنة بين نقاوة وخصائص بعض مستحضرات لومينول المتاحة تجاريًا ، وكذلك ملح الصوديوم لومينول ، المنقى عن طريق إعادة التبلور من محلول هيدروكسيد الصوديوم.

2. إنقاص المناعة معزز بالبروتينات

تم استخدام المقايسة المناعية المحسنة كيميائية مع البيروكسيديز كعلامة إنزيم للكشف عن العديد من المركبات. يتم إعطاء عدد من الأمثلة في الجدول. 5. تم استخدام طرق الاستخراج المعقدة والمناعة المناعية في هذه المقايسات المناعية ، بالإضافة إلى ناقلات المواد الصلبة الأكثر استخدامًا.

نسبة الإشارة / الخلفية في تحديد الإشعاع الكيميائي لبيروكسيداز الفجل مع التحسين باستخدام L-iodophenol ؛ 6 TLC - كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة.

أرز. يوضح الشكل 3 مخطط تحديد الهرمون المنبه للجريب. في هذه الطريقة ، يبلغ حد اكتشاف FSH على لوحة ميكروتيتر حوالي 0.01 pmu. تتميز هذه الطريقة بإمكانية استنساخ ممتازة سواء في نفس المدى أو بين الأشواط.

تم أيضًا استخدام طريقة اللمعان الكيميائي المحسن بنجاح للكشف عن ملصق البيروكسيداز في دراسة تهجين الحمض النووي.

طريقة المضاد الفلوريسينج (MFA).

طريقة القياس الكمي باستخدام مقياس ضوئي لوحة والتحليل النوعي باستخدام الكشف الفوتوغرافي مع حساسية من عدة بيكوجرامات.

الأجهزة

يوجد حاليًا عدة أنواع من أجهزة قياس اللمعان المتاحة في الصناعة مناسبة لقياس الضوء المنبعث في تفاعلات اللمعان الكيميائي المحسنة.

تم تعديل بعض مقاييس الإضاءة هذه خصيصًا لتحليل اللمعان الكيميائي المعزز. لقد سهلت شدة ومدة انبعاث الضوء في تفاعلات تحسين اللمعان تطوير مقاييس الإضاءة البسيطة التي تستخدم الثنائيات الضوئية السيليكونية أو فيلم التصوير عالي السرعة ككاشفات.

أجهزة قياس اللمعان هذه غير مكلفة نسبيًا وقابلة للحمل ، وبالتالي يمكن استخدامها خارج المختبرات. حاليًا ، تنتج أنظمة المناعة MAST كاميرات خاصة للكشف عن الغلوبولين المناعي الخاص بمسببات الحساسية E في طريقة ELISA. يتم إجراؤها في العيادات والمستشفيات أو في المنزل.

الأجهزة المصنعة ومجموعات الكواشف.

مجموعات المقايسة المناعية المحسنة للإنزيم الكيميائي والأدوات ذات الصلة متاحة الآن تحت اسم Amerlite من Amersham International pic.

يتم إجراء الفحص على شرائح من لوحات ميكروتيتر لون أبيض، ويتم إجراء قياس اللمعان بشكل سريع وتلقائي بواسطة مقياس اللمعان المخصص للصفيحة الميكروية.

حاليًا ، يتم إنتاج مجموعات لتحديد الهرمون المحفز للغدة الدرقية ، الكوريوجونادوتروبين البشري ، المستضد السرطاني المضغي ، بروتين ألفا فيتوبروتين ، هرمون الغدة الدرقية ، ثلاثي يودوثيرونين ، ولتحديد مؤشر هرمون الغدة الدرقية الحر. هذه المقايسات لها حساسية عالية وقابلية استنساخ ممتازة.

الاستنتاجات

يتميز تحديد ملصق البيروكسيديز باستخدام التلألؤ الكيميائي المحسن بحساسية عالية وخصوصية وبساطة ويمكن استخدامه كأساس لتطوير ملائمة و طرق سريعةالمقايسة المناعية الإنزيمية ، والتي يتم إجراؤها باستخدام أدوات محمولة رخيصة الثمن.

مبادئ المقايسة المناعية للإنزيم ، الأنواع الرئيسية من ELISA ، التطبيق في التشخيص

طرق المقايسة المناعية في الممارسة الطبية ، تفاعل مستضد وجسم مضاد في أساسه.

تعتمد أنواع المقايسة المناعية على نوع الملصق وظروف الاختبار. خصائص المكونات المستخدمة في المقايسة المناعية الإنزيمية.

الملخص ، تمت الإضافة 11/07/2011

التفاعلات المصلية

التفاعلات المصلية كتفاعلات بين المستضدات والأجسام المضادة في المختبر.

تصنيف التفاعلات المصلية حسب طبيعة المستضد وحالته الفيزيائية. تفاعل ترسيب الهلام وفقًا لـ Ouchterlony. طريقة الإنزيم المناعي.

عرض تقديمي ، تمت الإضافة 06/03/2015

التحليل الطيفي لتخطيط القلب

وسائل تسجيل وتحليل مخططات القلب. مقارنة بين معالجة الإشارات التناظرية والرقمية.

فحص إشارات القلب التي تم الحصول عليها باستخدام مخطط كهربية القلب فائق الدقة. إمكانيات التحليل باستخدام حزمة MatLab.

الملخص ، تمت الإضافة في 12/09/2011

استخدام الإشعاع في الطب

علاج او معاملة الربو القصبيالأشعة تحت الحمراء. المصادر الاصطناعية للأشعة فوق البنفسجية في الطب. مصابيح مبيد للجراثيم خالية من الأوزون والأوزون.

تطهير مياه الشرب بالأشعة فوق البنفسجية. جهاز التشخيص بالأشعة السينية.

الملخص ، تمت الإضافة في 08/27/2009

ضخامة الاطراف

ضخامة النهايات مرض مرتبط بزيادة إنتاج هرمون النمو (الهرمون الموجه للجسد). الصورة السريرية للمرض. مؤشر مختبري مميز لتضخم الأطراف في التشخيص. اختبار مع الثيروليبرين. العلاج بالأشعة السينية.

عرض تقديمي ، تمت الإضافة في 05/03/2012

علامات الورم في الممارسة السريرية

استخدام التحاليل المخبرية لتشخيص أمراض الأورام ومراقبة ما بعد الجراحة لفعالية الجراحة والعلاج الكيميائي.

تحديد علامات الورم عن طريق المقايسة المناعية الإنزيمية والتلألؤ المناعي وطرق المقايسة المناعية الإشعاعية.

الملخص ، أضيف بتاريخ 10/09/2010

الطرق الفيزيائية والكيميائية لتحليل الأدوية

تصنيف طرق التحليل الفيزيائية والكيميائية. التحليل الطيفي للامتصاص الجزيئي. قوانين امتصاص الإشعاع. قياس الألوان المرئي. تحديد التركيز في القياس الكهروضوئي. قياس الطيف الضوئي للأدوية.

الملخص ، تمت الإضافة في 11/14/2010

التطبيقات الرئيسية للتلألؤ الكيميائي المنشط

آلية التفاعلات المصحوبة بتوهج الكائنات الحية المرئية للعين المجردة.

استخدام اللمعان الكيميائي المنشط والتألق البيولوجي كأداة في الدراسات الطبية والبيولوجية لمصل الدم والبول والسائل النخاعي واللعاب.

ورقة المصطلح ، تمت إضافة 10/25/2011

الأساليب الحديثة في تشخيص الأمراض المعدية

طرق تشخيص الأمراض المعدية في الحيوانات.

بوليميراز تفاعل تسلسلي. إنزيم المقايسة المناعية وأهدافها. تشخيص الالتهابات التي تسببها المكورات العنقودية والمكورات الرئوية والسالمونيلا. العامل المسبب لمرض البروسيلا وتشخيصه.

تمت إضافة الملخص بتاريخ 12/26/2013

تسميات الانارة

مفهوم اللمعان وطبيعته الفيزيائية وأسباب حدوثه.

قاعدة ستوكس. أنواع اللمعان (التلألؤ الضوئي ، اللمعان الكيميائي) ومخرجاته. القوانين الأساسية للإشعاع الحراري. التحليلات الانارة والنوعية والكمية للمواد.

عرض تقديمي ، تمت الإضافة في 05/05/2016

نقص تروية القلب

1.1 تصنيف مرض الشريان التاجي

يشمل IHD العديد من الأمراض التي تختلف اختلافًا كبيرًا في المظاهر السريرية.

عيادة التهاب لب السن المزمن: ليفي ، تضخمي ، غرغرينا

تصنيف

التهاب لب السن الحاد احتقان اللب مصلي محدود منتشر صديدي رضحي التهاب اللب المزمن الغنغريني الليفي الضخامي (التكاثري) تفاقم التهاب لب السن المزمن ...

التهاب الضرع

4.

تصنيف

التصنيف الجراحي لالتهاب الضرع: أولاً: بسبب المرض: 1. غير محدد. 2. محدد. ثانيًا. حسب الحالة الوظيفية للثدي: 1. الإرضاع.

المقايسة المناعية (إليسا)

2. عدم الإرضاع. ثالثا. على طول مسار العملية الالتهابية: 1. حاد. 2. مزمن. رابعا ...

النباتات الطبية والمواد النباتية الطبية المستخدمة في الطب لتحصي البول

1.1 التصنيف

يمكن تصنيف تحصُّب البول وفقًا لتوطين الحصوات: حصوات الكلى والحالب (تحصي الكلية) ، حصوات مثانة. ربما تقسيم تحص بولي وفقا لتكوين الحساب ...

سرطان الحنجرة

3.

تصنيف

حسب التصنيف المحلي لسرطان الحنجرة (مجموعة تعليمات وزارة الصحة ، هناك 4 مراحل: المرحلة الأولى: يحتل الورم جزءًا فقط من قسم واحد من الحنجرة لا يخترق أعمق من الطبقة تحت المخاطية ...

سرطان المثانة

2. التصنيف

يتم تمثيل أورام المثانة في الغالب بسرطان الخلايا الانتقالية.

ومع ذلك ، لمنع أخطاء التشخيص ، يجب ألا ننسى أن ...

سرطان المريء

تصنيف

التصنيف النسيجي الدولي لأورام المريء (1990): الأورام الظهارية. اورام حميدة. الورم الحليمي الحرشفية. الثؤلول الفيروسي. الورم الحميد. الأورام الخبيثة.

سرطانة حرشفية الخلايا…

الجروح ، تصنيف الجروح ، المطهرات الميكانيكية في علاج الجروح

تصنيف الجروح

هناك عدة تصنيفات للجروح. وفقًا لطبيعة تلف الأنسجة ، يتم تمييز الجروح: طعنة ، قطع ، مقطوعة ، كدمات ، ممزقة ، لدغة ، مسمومة ، طلق ناري. جروح الطعنات تُلحق بسلاح ثاقب (حربة ، إبرة ، إلخ) ...

المصادر النباتية للتانين واستخدامها في الطب

2.

تصنيف

يتم تقسيم جميع العفص إلى العفصالمجموعات: قابلة للتحلل بالماء ومكثفة. العفص القابل للتحلل بالماء ، تحت تأثير الأحماض المعدنية المخففة والقواعد وإنزيمات تانيناسيل هيدرولاز ، يتحلل إلى كربوهيدرات وأحماض فينول كربوكسيلية ...

تأهيل الأطفال المصابين بالشلل الدماغي

1.2 تصنيف الشلل الدماغي.

حاليًا ، يستخدم الاتحاد الروسي تصنيف K.A.

سيمينوفا (1974). - شلل نصفي تشنجي - وجود آفة سائدة في الساقين - شلل نصفي مزدوج - شلل رباعي تشنجي ، تتأثر الأيدي أكثر إلى حد ما ...

التهاب المفصل الروماتويدي

1. التصنيف

لعقود من الزمان ، كان التهاب المفاصل الروماتويدي في مركز اهتمام علم الروماتيزم ، وهو ما يعكس الأهمية الكبرى للمرض من الناحية الطبية والاجتماعية العامة ...

دور الطرق غير الدوائية في علاج الربو القصبي

1.1.1 التصنيف

ينقسم الربو القصبي (BA) إلى مرحلة تفاقم (ذروة المرض) ومغفرة (عندما لا توجد علامات المرض عمليًا).

في نوبة الربو ، يتم تمييز فترة السلائف (العطس ، سيلان الأنف ، إلخ).

دور المسعف في تشخيص مرض التيتانوس وعلاجه والوقاية منه. تدابير مكافحة الأوبئة في بؤرة الأمراض المعدية. الديناميكيات والتحليل المقارن لأمراض التيتانوس في منطقة سالسكي للفترة 2013-2014.

1.4 التصنيف

تأخذ خصائص التصنيف في الاعتبار عوامل مختلفة - آلية العدوى ، وانتشار وشدة متلازمة التشنج ، وخصائص الدورة السريرية.

مع الأخذ في الاعتبار هذه العوامل ، يتم تمييز الأشكال التالية من التيتانوس: 1 ...

دور المسعف في تنظيم وإجراء التشخيص والعلاج و اجراءات وقائيةلمكافحة ارتفاع ضغط الدم

1.2 التصنيف

خلال فترة دراسة المرض بأكملها ، تم تطوير أكثر من تصنيف واحد لارتفاع ضغط الدم: وفقًا لـ مظهر خارجيالمريض ، أسباب زيادة الضغط ، المسببات ، مستوى الضغط واستقراره ، درجة تلف العضو ، طبيعة الكورس ...

داء السكري

1.1 التصنيف

هناك عدة أنواع من التصنيف داء السكري، والتي تستند إلى الصورة السريرية، المسببات ، درجة تعويض التمثيل الغذائي للكربوهيدرات ، شدة العلاج ، المضاعفات ...

المقايسة المناعية (إليسا)- دراسة معملية حديثة ، يتم خلالها البحث عن أجسام مضادة معينة في الدم أو مستضدات لأمراض معينة من أجل تحديد ليس فقط مسببات المرض ، ولكن أيضًا مرحلة المرض.

يمكن إصدار نتائج ELISA نوعيًا وكميًا.

حاليًا ، يتم استخدام ELISA في المواقف التالية:

1) البحث عن أجسام مضادة محددة لأي مرض معدي ؛
2) البحث عن مستضدات أي أمراض (أمراض معدية ، تناسلية) ؛
3) دراسة الحالة الهرمونية للمريض.
4) فحص علامات الورم.
5) الفحص لوجود أمراض المناعة الذاتية.

مزايا طريقة ELISA:

1) الدقة والنوعية العالية لطريقة ELISA (أكثر من 90٪).
2) القدرة على تحديد المرض وتتبع ديناميات العملية ، أي مقارنة كمية الأجسام المضادة في فترات زمنية مختلفة.
3) توافر تشخيص ELISA في أي مؤسسة طبية.

عيب نسبي:

1) تحديد الاستجابة المناعية (الأجسام المضادة) ، ولكن ليس العامل الممرض نفسه.

مفاهيم أساسية

قبل توضيح جوهر طريقة ELISA ، دعونا نفهم بإيجاز بعض المفاهيم.
الأجسام المضادة (أو الغلوبولين المناعي - Ig)- بروتينات معينة ينتجها B -
الخلايا الليمفاوية (الخلايا المناعية) استجابةً لابتلاع أي ممرض معدي (فيروسات ، بكتيريا ، فطريات ، إلخ).

هناك الغلوبولين المناعي A (IgA) ، الغلوبولين المناعي E (IgE) ، الغلوبولين المناعي M (IgM) ، الغلوبولين المناعي G (IgG) ، الغلوبولين المناعي D (IgD). وهي تختلف عن بعضها البعض في الشكل الجزيئي والكتلة ، والعمر النصفي ، والمشاركة / عدم المشاركة في العمليات المعدية ، ووقت الكشف من لحظة الإصابة. إذا أخذنا في الاعتبار الوزن الجزيئي ، فغالباً ما يمتلكه IgM - فهو خماسي (950000 دالتون) ، على عكس باقي Ig (من 150 إلى 200000 Da) ، والذي بسببه لا يستطيع IgM ببساطة المرور عبر حاجز المشيمة.

لذلك ، فإن اكتشاف IgM في طفل يبلغ من العمر سنة واحدة هو دائمًا علامة على إصابة الجنين. في مصل الدم ، يتم تمثيل الجزء الأكبر من الغلوبولين المناعي بواسطة IgG (75-85٪) ، وأقلها هو IgE (0.003٪). فقط IgA و M و G هم الذين يشاركون بشكل مباشر في العملية المعدية. IgE هي علامة على ردود الفعل التحسسية والأمراض ، ولا يمكن العثور على IgD إلا في أنسجة الغدد الليمفاوية واللوزتين ، ويلعب دورًا في تكوين المناعة المحلية.

فئات الغلوبولين المناعي

المستضدات- المواد الجزيئية من أصل عضوي ، ولا سيما مسببات الأمراض المعدية والأمراض الأخرى ، وكذلك المواد من مختلف الخلايا المتغيرة التي تكونت في مرض معين (أمراض المناعة الذاتية ، علم الأورام).

مجمع المناعة- مركب مستضد - جسم مضاد يشارك في عملية المناعة.

ما هو أساس طريقة ELISA.

هناك عدة أنواع من ELISA (طريقة مباشرة ، غير مباشرة ، منع ، تنافسية) ، ومع ذلك ، في الممارسة العملية ، يتم استخدام المقايسة المناعية غير المتجانسة للطور الصلب أو ELISA (مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم) في أغلب الأحيان

أساس مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم هو التفاعل المناعي لمستضد وجسم مضاد مع تكوين مركب مناعي: جسم مضاد للمستضد ، مما يؤدي إلى تغيير في النشاط الأنزيمي لملصقات معينة على سطح الأجسام المضادة.

جوهر طريقة ELISA

بعبارات بسيطة ، يمكن تقسيم هذه العملية إلى عدة مراحل:

1) على سطح آبار قرص الطبيب الذي يجري الفحص ، يوجد مستضد منقى لممرض معين.

عند إضافة المادة البيولوجية (مصل الدم) للمريض ، يحدث تفاعل محدد بين هذا المستضد والجسم المضاد المطلوب (الغلوبولين المناعي). هذا المركب سيكون بمثابة "مستضد خاص" في الخطوة التالية.

2) في هذه المرحلة ، يتم تكوين IR (المجمعات المناعية) - التفاعل بين "المستضد الخاص" والمقارن (هذا غلوبولين مناعي موصوف بإنزيم البيروكسيداز). يضاف كروموجين خاص. نتيجة هذا التفاعل الإنزيمي هو تكوين مادة ملونة في بئر القرص ، وتعتمد شدة اللون على كمية الغلوبولين المناعي (الأجسام المضادة) الموجودة في مادة المريض.

3) بعد ذلك ، يتم تقييم النتيجة: القياس الضوئي باستخدام مقياس الطيف الضوئي متعدد القنوات ، مقارنة الكثافة البصرية لمواد الاختبار مع الكثافة الضوئية لعينات التحكم ، المعالجة الرياضية للنتائج.

تعتمد كمية الأجسام المضادة في المريض بشكل مباشر على ارتفاع الكثافة البصرية لبئر معين.

عادة ، يتم استخدام 96 لوحة جيدة في الممارسة.

عند قياس الكثافة الضوئية (OD) لسائل الاختبار ، يتم حساب عدد (أو تركيز) الأجسام المضادة في وحدة حجم معينة.

ثم تتم مقارنة النتيجة بعينة تحكم.

يتذكر:لكل نظام اختبار ، يتم تطوير المؤشرات الفردية لمراعاة النتائج ومؤشرات القاعدة وعلم الأمراض (أي "القيم المرجعية"). يجب أن يؤخذ ذلك في الاعتبار عند تقييم نتائج كل دراسة محددة. ليس من الصحيح تفسير نتائج أحد المختبرات من "القيم المرجعية" لمختبر آخر.

كما أنه من غير الصحيح مقارنة نتائج المختبرات المختلفة مع بعضها البعض.

عند إعداد تفاعلات ELISA ، فإن مفهوم مثل نشاوة الجسم المضاد مهم أيضًا.
نهم الجسم المضاد- هذه هي قوة الرابطة بين الجسم المضاد والمستضد وكمية المستضد المرتبطة بالجلوبيولينات المناعية (الأجسام المضادة).

للشهوة أهمية كبيرة في تقييم المدة المتوقعة للعدوى ، وهو أمر مهم للغاية في تشخيص العدوى الأولية عند النساء الحوامل.

يتكون أساس اختبار شغف الجسم المضاد من معالجة المركب المناعي (مستضد - جسم مضاد) بمحلول اليوريا لتدمير البروتين.

تظل الروابط العالية المتعطشة سليمة ، بينما يتم تدمير الروابط المنخفضة الشغوفة. يتم إعطاء النتيجة كمؤشر شغف ، معبراً عنها كنسبة مئوية (٪).

ما هي الأمراض التي يتم الكشف عنها عن طريق تشخيص ELISA؟

علامات أمراض المناعة الذاتية ومؤشرات المناعة البشرية (إجمالي IgE ، إجمالي IgG ، إجمالي IgA ، إجمالي IgM ، إجمالي IgD ، إفراز IgA ، IgG 2 ، IgG4 ، معقدات مناعية CEC ، IgA و IgG إلى gliadin وغيرها)

3. علامات الأورام (TNF - عامل نخر الورم ، CEA - مستضد السرطان الجنيني ، PSA - مستضد البروستات النوعي ، hCG - موجهة الغدد التناسلية المشيمية البشرية ، CA 125 ، alveomucin وغيرها الكثير)

الاضطرابات التناسلية (استراديول ، هرمون البروجسترون ، البرولاكتين ، هرمون التستوستيرون ، بروتين ألفا-ألفافيتوبروتين ، FSH - هرمون منشط للجريب وغيرها)

5. أمراض الغدة الدرقية (الحرة والمقيدة T3 ، T4 ، ثيروجلوبولين ، ثيروبيروكسيداز - TPO ، هرمون الغدة الدرقية - TSH).

لا يتم تمثيل هذه القائمة بجميع الأمراض التي يتم تشخيصها باستخدام المقايسة المناعية الإنزيمية.

مواد لتحليل ELISA وقواعد جمعها

المادة الأكثر شيوعًا لتفاعل ELISA هي مصل دم المريض ، ويتم تناوله على معدة فارغة.

يمكن أن تكون المادة أيضًا بمثابة السائل النخاعي والسائل الأمنيوسي ومحتويات الجسم الزجاجي ومخاط قناة عنق الرحم والإحليل ومسحات.

تحضير المرضى لتسليم المواد الخاصة بـ ELISA

يؤخذ الدم على معدة فارغة. لا تحتاج إلى تناول أي دواء قبل التبرع بالدم.

يتم إجراء التحليل الإنزيمي المناعي للمادة بسرعة ، في غضون يوم واحد.

يمكن أن يكون التأخير في المعامل المختلفة بسبب تراكم كمية معينة من الأمصال.

النتائج المحتملة لتشخيص ELISA

عند تقييم نتائج عدوى معينة ، فإن فئة الأجسام المضادة المكتشفة وعددها مهمان.

هذا لا يحدد فقط مسألة مسببات العدوى (سواء كان ذلك أم لا) ، ولكن أيضًا المرحلة المتوقعة من المرض (الحاد ، المزمن) ، وكذلك وجود عدوى نشطة (حادة أو تفاقم مزمن) في وقت الفحص.

ما هو التوقيت التقريبي لظهور الأجسام المضادة (الغلوبولين المناعي - Ig)؟

أقرب الأجسام المضادة هي IgM.

المقايسة المناعية الإنزيمية (ELISA)

يمكن اكتشافها بعد 1-3 أسابيع من الإصابة المحتملة ، والتي تميز المرحلة الحادة من العملية المعدية. الحالة الثانية لظهور الأجسام المضادة IgM هي تنشيط (أو تفاقم) عملية مزمنة. تنتشر الأجسام المضادة IgM في المتوسط ​​لمدة 3 أشهر تقريبًا ، ثم يختفي عددها تدريجيًا. ومع ذلك ، في بعض المرضى ، يمكن الكشف عن كميات ضئيلة من IgM في غضون 1-2 سنوات من الإصابة.

أنظمة الاختبار الحديثة حساسة للغاية ، مما يؤدي إلى نتائج إيجابية خاطئة غير محددة (غالبًا عند النساء الحوامل).

لذلك ، في هذه المجموعة من المرضى ، يجب إعادة فحص IgM الإيجابي!

تظهر الأجسام المضادة IgA بعد 2-4 أسابيع من الإصابة ، ولكن بكمية كافية للكشف - بعد شهر. يتم تصنيع المصل IgA بواسطة خلايا البلازما في الطحال والعقد الليمفاوية والأغشية المخاطية ، ويتركز إفراز IgA على الأغشية المخاطية لأداء وظيفتها الوقائية - فهي تشارك في المناعة المحلية.

من الأسبوع الرابع بعد الإصابة ، تبدأ الأجسام المضادة IgG في الظهور.

في معظم حالات العدوى ، يزداد عيارها تدريجيًا بحد أقصى تواريخ مختلفة(بمعدل 1.5-2 شهرًا) ، ثم يظل العيار عند مستوى منخفض ويشير إلى المناعة. في بعض الأمراض (الميكوبلازما ، الكلاميديا ​​، داء المشعرات) ، مستوى IgG ليس مرتفعًا ، ينخفض ​​بشكل كبير بسبب نقص المناعة في هذه الالتهابات.

خيارات الكشف عن الأجسام المضادة من مختلف الفئات:

- الكشف المعزول عن الأجسام المضادة IgM يوحي بوجود أولي
عدوى.
- يعتبر الاكتشاف المتزامن لـ IgM و IgG في الدم من سمات الإصابة الأولية
في الأشهر 2-3 السابقة ، وكذلك أثناء تفاقم مرض مزمن.

لذلك ، أثناء الحمل ، لا يكون وجود IgM دائمًا علامة على الإصابة الأولية.
- قد يشير الكشف عن IgG في عزلة إلى كلا من المناعة لهذا المرض ،
وكذلك الالتهابات المزمنة. في الحالة الثانية ، كل من كمية الأجسام المضادة (العيار) والتغير في هذا العيار بمرور الوقت مهمان. عادة ، يتم إجراء الدراسات على فترات من 2-4-6 أسابيع.
- الكشف عن IgA وحده أو مع IgM يشير إلى وجود عدوى أولية. في
من المتوقع أن يؤدي ظهور IgA مع IgG إلى تنشيط عدوى مزمنة (في المتوسط ​​أسبوعين من لحظة التفاقم).

إن تحديد نهم الأجسام المضادة لـ IgG هو خطوة تكميلية ممتازة في تشخيص العدوى الأولية من عدوى طويلة الأمد ، والتي لها أهميتها السريرية ، في المقام الأول في تقييم مخاطر إصابة الجنين بالعدوى داخل الرحم.

يشير اكتشاف IgG منخفض الشغف إلى وجود عدوى أولية ويتم اكتشافه في المتوسط ​​بعد 4-6 أشهر من الإصابة ، ونادرًا ما يكون أطول. تتطلب مستويات IgG المنخفضة الشغوف تأكيدًا مختبريًا آخر للعدوى الأولية (IgM).

الأجسام المضادة الشديدة هي إما علامة على مرض مزمن وتفاقمه ، أو مناعة متطورة.

الميزات عند الرضع:في الأطفال حتى سن عام ، وأحيانًا 1.5 سنة ، ينتقل IgG للأم في الدم إلى عدوى مختلفة (أي أنهم اخترقوا المشيمة من الأم إلى الجنين أثناء نمو الجنين).

هم ليسوا في حد ذاتها علامة على وجود عدوى في الوقت الحاضر. إذا تم الكشف عن IgM في هذا العمر (تذكر أن IgM الأم لا تستطيع عبور المشيمة) ، فهذه علامة على وجود عدوى داخل الرحم أو عدوى مكتسبة بعد الولادة.

طريقة ELISA الكمية

يتم إصدار نتيجة تشخيص ELISA (باستخدام محلل المقايسة المناعية الإنزيمية) في وحدات قياس معينة:
- الكثافة البصرية (OD) للعينة هي تركيز الأجسام المضادة المحددة لكل وحدة حجم.

كلما زاد OD للعينة ، زاد تركيز الجسم المضاد. بعض النتائج تتحدث عن معامل الإيجابية (PC) - وهي أيضًا الكثافة البصرية للعينة.
- وحدات تركيز الجسم المضاد (نانوجرام / مليلتر أو نانوغرام / مل).

- في شكل عيار مصل: 1:20 ، 1:40 ، 1: 100 ، 1: 200 ، 1: 400 ، 1: 800 ، 1: 1200 وهكذا. التتر التشخيصي (الذي يتم فيه تشخيص المرض وليس حقيقة العدوى) يختلف باختلاف الأمراض.
- في شكل رموز - "+" ، "-" ، "؟" (+، ++، +++، ++++).
- في شكل تقييم نوعي وفق معيار معين (سلباً أو إيجاباً).

تقييم كمية الأجسام المضادة بشكل صحيح ، وهو نوع من الكشف عن فئة الغلوبولين المناعي ، وبالتالي ، يمكن للطبيب فقط تحديد مرحلة المرض والحاجة إلى العلاج.

يجب ألا ننسى أنه بالنسبة لأي نظام اختبار ، يتم تطوير "القيم المرجعية" الخاصة بهم (متغيرات القاعدة) ، إذا تم تجاوزها ، يتم تشخيص مرض معين (متغيرات علم الأمراض).

لأنظمة الاختبار المختلفة ، تختلف "القيم المرجعية".

لا يمكن إجراء مقارنة صحيحة لنتائج ELISA المأخوذة في الديناميكيات إلا إذا تم إجراؤها في نفس المختبر.

طبيب الأمراض المعدية NI Bykova